免疫熒光(immunofluorescence，IF)，通常是指用熒光標(biāo)記的抗體示蹤或檢查樣品中相應(yīng)抗原的方法。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)，將不影響抗原抗體相互作用的熒光分子標(biāo)記在抗體上，與其相應(yīng)的抗原反應(yīng)后，在熒光顯微鏡下針對(duì)熒光標(biāo)記分子的激發(fā)光發(fā)射光進(jìn)行觀察，從而檢測(cè)目的指標(biāo)的相對(duì)含量、在組織細(xì)胞中的定位。
產(chǎn)品名稱(chēng)：四色多重免疫熒光試劑盒（三標(biāo)四色）

原理介紹:酪酰胺信號(hào)放大(TSA，Tyramidesignalamplification)技術(shù)是一類(lèi)利用辣根過(guò)氧化酶（HRP）對(duì)靶蛋白進(jìn)行標(biāo)記的酶學(xué)檢測(cè)方法，類(lèi)似常規(guī)免疫組化的DAB顯色方法，TSA 技術(shù)同樣采用HRP標(biāo)記的二抗，同樣有對(duì)應(yīng)的“顯色”步驟（HRP催化加入反應(yīng)體系的酪胺熒光素底物，產(chǎn)生活化熒光底物，活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價(jià)結(jié)合，使樣品上穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合酪胺熒光素。之后用熱修復(fù)法洗去非共價(jià)結(jié)合的一抗-二抗-HRP復(fù)合物，重復(fù)下一種一抗-hrp二抗來(lái)第二輪孵育，換另一種酪胺熒光素底物，如此往復(fù)就可實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記。
TSA詳細(xì)原理是利用酪胺Tyramide的過(guò)氧化物酶反應(yīng)(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價(jià)鍵結(jié)合位點(diǎn))，產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物，該產(chǎn)物能與周?chē)牡鞍讱埢?包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結(jié)合，這樣在抗原-抗體結(jié)合部位就有大量的熒光素沉積，結(jié)果使其檢測(cè)信號(hào)得到10-100倍增強(qiáng)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP（而不是直接偶聯(lián)熒光素），來(lái)催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。熒光素在HRP和過(guò)氧化氫的作用下被活化，跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價(jià)偶聯(lián)，使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。然后微波或煮沸或者水浴等熱修復(fù)處理，前一輪非共價(jià)結(jié)合的抗體被洗掉，共價(jià)結(jié)合的熒光素穩(wěn)定共價(jià)結(jié)合在樣本切片蛋白上。再換個(gè)一抗來(lái)第二輪孵育，周而復(fù)始。等到所有抗體孵育結(jié)束，熒光素都結(jié)合好后，最后去檢測(cè)結(jié)果。由于每次體系中都只有單一抗體孵育，因此無(wú)需擔(dān)心抗體交叉反應(yīng)，以及一抗二抗種屬匹配問(wèn)題，大大減少了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)不同種屬抗體選擇匹配的限制。也就是說(shuō)，如果用TSA技術(shù)，同一張片子上所有的靶標(biāo)都可以選用特異性高的兔單克隆抗體。搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，而且信號(hào)放大的倍數(shù)大大增強(qiáng)。本公司開(kāi)發(fā)的試劑盒具體酪胺熒光染料為以下其中一種或者多種：480，520，570，620，690，780，488，CY3.此試劑盒中的熒光染料可單獨(dú)或配合使用。可以實(shí)現(xiàn)單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)以及更多重?zé)晒夥糯?多重同源抗體熒光標(biāo)記等功能，極大豐富了此試劑盒的內(nèi)涵。