12mL親和層析柱由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，僅用于生物化學(xué)研究方面，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要12mL親和層析柱等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。

北京百奧萊博科技有限公司是一家專業(yè)的生物試劑銷售公司。公司主要經(jīng)營血清、抗原、抗體等生物試劑產(chǎn)品，可以為您提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)，以優(yōu)良的價格、優(yōu)質(zhì)的服務(wù)、優(yōu)先的理念，滿足客戶的各方面的需求，與國內(nèi)多家企業(yè)、單位建立了良好的長期合作關(guān)系，擁有較好的企業(yè)信譽和品牌形象。 主營產(chǎn)品:血清、抗體、抗原、核酸提取、核酸純化等生化試劑

特別提示：包括12mL親和層析柱在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：12mL親和層析柱
英文名稱：Affinity Chromatography Colum(12mL)
產(chǎn)品貨號：BTN140651
產(chǎn)品規(guī)格：12mL

本產(chǎn)品適用范圍廣泛，可用于純化分離重組蛋白、抗體和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA結(jié)合蛋白等生物大分子；還可以用于去除生物樣品中的內(nèi)毒素等污染。

親和層析是利用生物分子間所具有的專一親和力而發(fā)明的純化技術(shù)。它是利用生物分子間存在的特異性相互作用(如抗原－抗體、酶－底物或抑制劑、激素－受體等)，通過將具有親和力的兩個分子中的一個固定在不溶性基質(zhì)上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進行分離純化。

親和層析柱常見的使用方法有重力法、手動加壓法、蠕動泵法，其示意圖如下：


儲存條件：常溫運輸及保存，有效期一年。

常用親和標(biāo)簽及純化方案：


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YT623 30% Acr-Bis (29:1) 100ml
WE0279 Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒 50次
WE0299 NC膜(0.22μM) 1 sheet
SNM387 RIPA裂解液(低強度) 100ml
RFT156 RIPA裂解液(強) 100ml
KFS227 ICAD蛋白檢測試劑盒 50T
JN0171 非生物素受體蛋白生物素化試劑盒(酶促) 65次
QN1187 麗春紅S 10g

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名稱：弱RIPA裂解液
貨號：BTN131008
規(guī)格：250mL
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等實驗。本產(chǎn)品裂解強度較強，對膜蛋白、胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白和各種轉(zhuǎn)錄因子均有很好的效果，本產(chǎn)品含有各種蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制劑，能有效防止各種蛋白酶對目的蛋白的降解。我公司各種RIPA裂解液產(chǎn)品特點見下表：

產(chǎn)品名稱	RIPA裂解液(強)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)
有效裂解成分	1% Triton X-100,1% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.5% deoxycholate,0.1% SDS	1% NP-40，0.25% deoxycholate
裂解強度	強	中	溫和
對膜蛋白的提取	很好	較好	一般
對胞漿蛋白的提取	很好	很好	很好
對核蛋白的提取	很好	較好	較好
胞漿磷酸化蛋白提取	很好	很好	很好
細胞核轉(zhuǎn)錄因子提取	很好	很好	很好
含蛋白酶抑制劑	是	是	是
含磷酸酯酶抑制劑	是	是	是
主要用途	WB,IP	WB,IP	WB,IP,co-IP

儲存條件：低溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：

對于培養(yǎng)細胞樣品：
1. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zuì終濃度為1mM。
2. 裂解細胞
2.1 對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。
2.2 對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。
3. 充分裂解后，10000-14000g離心3～5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意：通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。

對于組織樣品：
1. 把組織剪切成細小的碎片。
2. 融解RIPA裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF，使PMSF的zuì終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000～14000g離心3～5分鐘，取上清，即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注意：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

備注：
1.為取得zuì佳的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。
2.裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
3.用RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品，建議使用BCA蛋白濃度測定試劑盒，不建議使用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

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