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HS 578T細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)，HS 578T，上海素爾生物科技有限公司致力于生物醫(yī)藥領(lǐng)域的技術(shù)研發(fā)與生物試劑的銷售，力求為廣大生物科技研究者提供優(yōu)質(zhì)快捷的貼心服務(wù)。公司集研發(fā)、銷售、實(shí)驗(yàn)室技術(shù)服務(wù)于一體，并以多家歐美研究平臺(tái)的技術(shù)實(shí)力為依托，向市場(chǎng)提供品質(zhì)價(jià)格的超值服務(wù)，專業(yè)提供實(shí)驗(yàn)所需的各類細(xì)胞株，因子，抗體等多種生物試劑。公司細(xì)胞主要來源ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB、Sciencell等，以及少數(shù)外大學(xué)建系。輕小利，重品質(zhì)。避浮夸，求務(wù)實(shí)。您的滿意，將是我們不懈的追求。竭誠(chéng)歡迎廣大生物科技研究老師，前來咨詢合作。

HS 578T細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)，HS 578T 常見問題及解決辦法：

1）對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長(zhǎng)速度。

2）對(duì)于生長(zhǎng)不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時(shí)（即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長(zhǎng)，而旁邊則為一塊空白），此時(shí)可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

3）細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

HS 578T細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)，HS 578T 之細(xì)胞消化不下來原因：

1）有可能是你的培養(yǎng)液沒有去除干凈，因?yàn)榕囵B(yǎng)液可以中止消化。所以建議用PBS沖洗兩次。然后再加EDTA.

2）加大EDTA的濃度 ，可以選擇0.1％與trypsin混合使用，加大以上溶液的體積，可以用2ml。

3）37度溫度要夠。

4）實(shí)時(shí)查看，當(dāng)看到鏡下細(xì)胞折光度有改變，就是有作用，然后用培養(yǎng)液將細(xì)胞沖洗下來。

5）用冰D-Hank's液洗細(xì)胞兩次；

6）用剛解凍的冷的胰酶（注意不要37度孵育）1-2ml/100ml的培養(yǎng)瓶，開過口的和時(shí)間長(zhǎng)的都不用。

免疫共沉淀（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。

原理：

當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x，那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。

優(yōu)點(diǎn)：

（1）相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)；

（2）蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響；

（3）可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。

缺點(diǎn)：

（1）可能檢測(cè)不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用；

（2）兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；

（3）必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)目的蛋白是什么，以選擇后檢測(cè)的抗體，所以，若預(yù)測(cè)不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險(xiǎn)性。

注意的問題：

（1）細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP40或Triton X-100）。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的，通過經(jīng)驗(yàn)確定。不能用高濃度的變性劑（0.2%SDS），細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑。

（2）使用明確的抗體，可以將幾種抗體共同使用。

（3）使用對(duì)照抗體：

單克隆抗體：正常小鼠的IgG或另一類單抗

兔多克隆抗體：正常兔IgG

在免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)中要保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：

（1）確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生。

（2）要確?？贵w的特異性，即在不表達(dá)抗原的細(xì)胞溶解物中添加抗體后不會(huì)引起共沉淀。

（3）確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細(xì)胞中，而不是由于細(xì)胞的溶解才發(fā)生的，這需要進(jìn)行蛋白質(zhì)的定位來確定。

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