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RNA建庫試劑盒上線,誰才是真正的幕后玩家

發(fā)布時間:2019-07-18瀏覽次數:1027返回列表

RNA建庫試劑盒產品,適合于illumina測序平臺,試劑盒中的每種組分都經過了嚴格的質量控制。

建庫流程
利用oligo dT磁珠,從總RNA純化得到mRNA,經過片段化(300bp左右)、合成一鏈和二鏈cDNA,再通過末端修復、加A、連接接頭和PCR富集得到zui終的cDNA文庫。

Tips:RNA樣品檢測的4種主要方法
(1) 瓊脂糖凝膠電泳分析RNA降解程度以及是否有污染
(2) Nanodrop檢測RNA的純度(OD260/280比值)
(3) Qubit對RNA濃度進行定量
(4) Agilent 2100檢測RNA的完整性

適應范圍
樣本種類:動、植物及真菌等真核生物的總RNA
建庫起始量:100ng-1.5μg,推薦RNA RIN值≥7
插入片段:150bp-200bp或250-300bp
注:以1.5μg小鼠總RNA為起始模板,caliper檢測文庫大小分布情況,主峰值在408bp左右

溫馨提示:
(1)RNA純化在室溫條件下操作,RNA樣本稀釋后冰上放置,并盡快進入下一步實驗,避免RNA發(fā)生降解;
(2)RNA打斷條件以及后續(xù)片段篩選需要嚴格按照sop進行,否則會影響文庫大小及產量;
(3)試劑盒中的產品組分,不可拆分,不可與其他品牌同種試劑配套使用,否則影響建庫結果。

RNA建庫試劑盒注意事項
1、試驗前請仔細閱讀本說明書,注意每個組分的保存溫度,確保實驗順利完成。
2、Stranded Oligo需-80℃保存,使用時少量分裝使用。
3、操作過程請注意避免核酸樣品和產物之間的交叉污染。
4、請使用不含RNA酶或DNA酶的槍頭、EP管進行試驗。
5、建庫所使用的RNA必須是純化后質檢合格的樣本,否則會嚴重影響建庫結果;
6、實驗所用磁珠應提前30分鐘自4℃環(huán)境中取出,平衡至室溫。所有磁珠操作均需置于室溫。
7、80%乙醇需現配現用,用其清洗磁珠后,需清除干凈,避免對后續(xù)反應產生影響。








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