英文名稱:HumanInterleukin2,IL-2ELISAkit
規(guī)格:48T/96T
儲存溫度::-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)
有效期:6個月
產(chǎn)品供應商:上海遠慕生物
本試劑盒僅供科研實驗使用!
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中樣本水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入,再與HRP標記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中樣本濃度。
ELISA各種樣本收集、處理、保存方法
1.血清標本收集、處理、保存方法:
用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本,全血標本室溫放置1-2h或4℃過夜,然后4℃、3000rpm/min離心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
2.血漿標本收集、處理、保存方法:
根據(jù)樣本要求選擇EDTA或肝素鈉或枸緣酸鈉作為抗凝劑,用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本,室溫混合20min左右,然后4℃、3000rpm/min離心20min,小心收集上清即為血漿。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
3.尿液標本收集、處理、保存方法:
用干凈容器收集尿液,4℃、3000rpm/min離心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。
4.唾液標本收集、處理、保存方法:
用干凈離心管收集唾液,4℃、3000rpm/min離心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。
5.細胞標本收集、處理、保存方法:
(1)細胞培養(yǎng)上清
取細胞培養(yǎng)上清到干凈離心管中,4℃、3000rpm/min離心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。
(2)細胞裂解液
收集細胞培養(yǎng)液,4℃、3000rpm/min離心20min,棄去上清,用預冷的PBS(0.01M,PH7.4)洗滌三次。加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通過反復凍融,使細胞充分裂解。然后4℃、10000rpm/min離心20min,除去細胞碎片,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。
6.植物標本收集、處理、保存方法:
取適量大小組織塊(一般0.2-0.5g),用預冷的PBS緩沖液(0.01M,PH7.4)漂洗三次,濾紙拭干水分。準確稱重,放入勻漿管中,加入4倍體積的勻漿介質(zhì)(0.05mol/LTris-HCl,pH7.4PBS緩沖液)于勻漿管中,冰水浴條件下,剪碎組織塊,手工勻漿或機器勻漿,制成勻漿液。4℃、10000rpm/min離心20min,取上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。
7.糞便標本收集、處理、保存方法:
采集時用干凈的竹簽挑取糞便樣本到離心管中,向離心管中加入適量PBS緩沖液(0.01M,PH7.4),攪拌均勻。然后4℃、10000rpm/min離心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。
8.組織標本收集、處理、保存方法:
將組織樣本用PBS緩沖液(0.01M,PH7.4)沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。將組織塊稱重,記錄后剪碎(碎塊盡量?。⒔M織按一定的比例(通常組織重量:PBS體積=1:9)加入預冷的PBS緩沖液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)中勻漿,勻漿時置于冰上。吸取勻漿液到離心管中,4℃、10000rpm/min離心20min,小心收集上清。置于-20℃(1-2周)或-80℃保存(較長時間),避免反復凍融。
注意事項
1.ELISA試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。