綠如藍(lán)染料，PCR級(jí)說(shuō)明書
產(chǎn)品編號(hào)：BTN70909
規(guī)格：1ml
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
第二代的非飽和型熒光染料（如SYBR Green I）在高濃度下會(huì)抑制熒光PCR，所以反應(yīng)重復(fù)性很不穩(wěn)定，并且不能用于要求嚴(yán)格的Tm 分析。本產(chǎn)品跟SYTO9、LC Green、EvaGreen 一樣，是第三代飽和型熒光染料，在飽和濃度下也不抑制熒光PCR 反應(yīng)，具有下列特點(diǎn)：
1. 飽和濃度不抑制PCR 反應(yīng)，因此得到的熒光信號(hào)更強(qiáng)。
2. 抗水解、抗熱解和抗光解的能力強(qiáng)于目前zui常用的SYBR Green I。
3. 飽和濃度下染料分子沒有機(jī)會(huì)在DNA 分子間發(fā)生移位，因此熒光強(qiáng)度跟DNA變性程度呈線性關(guān)系，可以用于精細(xì)的Tm 測(cè)定實(shí)驗(yàn)，如High-resolution melting curve analysis 等。
4. 跟目前常用的PCR 儀器(包括iCycler、LightCycler、ABI 測(cè)序儀) 兼容。
激發(fā)和發(fā)射光譜跟FAM 和SYBR Green I 接近，可以使用SYBR Green I 的光學(xué)設(shè)置參數(shù)。
5. 不能滲透進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，毒性和致突變性遠(yuǎn)低于SYBR Green I。
6. 可以用于qPCR、高分辨DNA 溶解曲線分析(HRM、high-resolution DNA melt curve analysis)、毛細(xì)管電泳等研究。
規(guī)格及成分：
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成分 |
規(guī)格 |
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綠如藍(lán)染料,PCR級(jí) |
1ml |
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說(shuō)明書 |
1份 |
保存條件：
常溫運(yùn)輸、-20℃避光保存，有效期一年。
自備試劑：
PCR 試劑、DNA 模板、引物、超純水。
使用方法：
先將本產(chǎn)品放置在室溫融化，然后震蕩10 秒鐘，短暫離心后待用。下面以50μL的標(biāo)準(zhǔn)PCR 反應(yīng)體系為例說(shuō)明其使用：
1. 在一干凈的PCR 管中，加入下列成分：
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10 X PCR Buffer (No Mg2+) |
5μl |
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MgCl2 50 mM |
2.5μl |
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dNTP 10 mM |
1μl |
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本產(chǎn)品(PCR 級(jí)綠如藍(lán)染料) |
2.5μl |
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Taq DNA聚合酶 |
1-5U |
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DNA模板 |
適量 |
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PCR引物 |
5-50 pmol each |
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補(bǔ)水到 |
50μl |
2. 放入熒光PCR 儀中進(jìn)行qPCR，并在退火或延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)記錄熒光信號(hào)。使用的光學(xué)參數(shù)可以跟FAM 或SYBR Green I 完全一樣。
注意事項(xiàng)：
1. 如果使用iCycler，可以不加FAM；如果使用ABI系統(tǒng)，需要在Well Inspector選項(xiàng)下的非特異參照中選擇“無(wú)”；使用LightCycler時(shí)，zui好在PCR 體系中再加入終濃度為0.5 mg/mL的BSA以降低儀器對(duì)染料和模板的非特異吸附。
2. 如果使用化學(xué)修飾過(guò)的Taq DNA聚合酶，可能需要減低KCl的濃度并提高Tris的濃度。
