酵母tRNA溶液說明書

產(chǎn)品編號：BTN70904

規(guī)格：1.5mL(A)/1.5mL(B)

產(chǎn)品及特點：

本產(chǎn)品分A 和B 兩個規(guī)格，濃度均為5mg/mL。A 是酵母tRNA 粗提液，用作制備更高純度（如分子生物級）酵母tRNA 的原材料。B 是精提液，是經(jīng)過本公司柱式RNAclean 純化的分子生物學級別的酵母tRNA 溶液，不含蛋白質(zhì)和DNA污染，OD260/OD280 在1.9 左右，可直接用作微量RNA 提取和回收的助沉劑，也可以用作原位雜交、Northern 雜交的封堵劑，對于探針為RNA 的雜交試驗尤其適用。

規(guī)格及成分：

保存條件：

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：以tRNA 粗提液（BTN70904A）為材料，酚法制備tRNA 精提液（BTN70904B）

1. 在1 倍體積的tRNA 粗提液中加入一倍體積的自備Tris 飽和酚，振蕩混勻后12000-15000 g 離心3 分鐘得上清。

2. 在上清中再加入一倍體積的自備Tris 飽和酚和0.2 倍體積自備的氯fang，振蕩混勻后12000-15000 g 離心3 分鐘得上清。

3. 重復此步直到酚相和水相之間沒有白膜出現(xiàn)。一般需要2-4 次抽提。

4. 在上清中加入0.1 倍體積的自備3M NaAc（pH5.2）和2 倍體積的自備無水乙醇，振蕩混勻。

5. 12000-15000 g 離心15 分鐘以上，小心移棄上清。

6. 用1mL 自備 75%乙醇洗一次（即加入1mL 75%乙醇，振蕩混勻后12000-15000 g 離心5 分鐘，小心移棄上清）。

7. 短暫離心數(shù)秒，小心移棄殘留液體，所得沉淀即是精提的酵母tRNA，可以溶解在自備的DEPC 水中，UV 測定其濃度，然后直接用于各種分子生物學實驗。

注意：tRNA 比較短，又是單鏈，所以電泳時結(jié)合EB 等染料的能力很弱，測定其濃度時zui好不要使用電泳比較法，而要使用分光光度法。

注意：此法得率較高，但缺點是不能去除部分多糖污染，因為多糖也能在醇沉淀時沉淀下來。如果zui后得到的溶液帶顏色，則需要用本公司柱式RNAclean 精提，詳細過程見該產(chǎn)品使用說明書。

二：tRNA 精提液（BTN70904B）作為核酸助沉劑

1. 在核酸(DNA 或/和RNA)溶液中，加入適當濃度的鹽離子，鹽離子不同其終濃度也不相同，具體如下：

2. 加入本產(chǎn)品使其終濃度為20 μg/mL，混合均勻。

3. 加入兩倍體積的乙醇，混合均勻。

4. 冰上放置15 分鐘。

5. 12000-15000 g 離心15 分鐘以上，小心移棄上清。

6. 用1mL 75%乙醇洗一次（即加入1mL 75%乙醇，振蕩混勻后12000-15000g 離心5 分鐘，小心移棄上清）。

7. 短暫離心數(shù)秒，小心移棄殘留液體。

8. 將沉淀溶于適當緩沖液中待用。

注：由于tRNA 是多聚核苷酸激酶和末端轉(zhuǎn)移酶的底物，因此如果回收的DNA 或RNA 要用于此類反應(yīng)，就不能使用tRNA 作為助沉劑。如果回收的RNA 要用于RT-PCR，使用tRNA 可能會對反應(yīng)的特異性產(chǎn)生干擾。

二：tRNA 精提液（70904B）作為雜交封堵劑

本產(chǎn)品可以作為原位雜交、Northern 雜交和RNA 斑點雜交的封堵劑，也可以作為Southern 雜交和DNA 斑點雜交的封堵劑，但不適于作為菌斑雜交。其在雜交液或預(yù)雜交液中的終濃度為100μg/mL。

如果使用RNA 探針，zui好使用本產(chǎn)品做封堵劑，以保護RNA探針。