一步法單菌落質(zhì)粒DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品編號(hào)：BTN70804

規(guī)格：50T

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

本產(chǎn)品是在百奧萊博一步式質(zhì)粒DNA提取試劑盒（BTN70301）基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的、能夠從單個(gè)菌落快速提取質(zhì)粒DNA 的產(chǎn)品。它之所以能夠從單個(gè)菌落中提取到可以用常規(guī)電泳方法檢測(cè)得到的質(zhì)粒DNA 是由于一步式細(xì)菌裂解技術(shù)能夠使細(xì)菌釋放出其幾乎所有的質(zhì)粒DNA。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 不需過(guò)夜培養(yǎng)細(xì)菌就可以提取質(zhì)粒DNA，能為研究人員節(jié)約一天的寶貴時(shí)間。

2. 快速，整個(gè)過(guò)程只需要不到十分鐘（對(duì)一個(gè)樣品而言）。

3. 一步式裂解細(xì)菌，不使用強(qiáng)堿溶液，對(duì)DNA 損傷小。

4. 得到的質(zhì)粒DNA 足夠1-2 次電泳或酶切實(shí)驗(yàn)，足夠多次PCR、測(cè)序和細(xì)菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。

5. 適用于高拷貝、中拷貝和低拷貝的質(zhì)粒。

格及成分：

保存條件：

常溫運(yùn)輸及保存（溶液A 需要4℃保存），有效期一年。

使用方法：

1. 用吸頭挑取一個(gè)直徑在2 mm 以上的菌落到100 μL 一步法單菌落質(zhì)粒DNA提取試劑盒溶液A 中（溶液A 用前搖勻），充分吹打或振蕩裂解直到裂解液變澄清。

2. 直接將裂解液全部轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，室溫靜置2 分鐘使質(zhì)粒DNA 與膜結(jié)合。室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。

3. 在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用預(yù)洗液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。注意: 如果通用預(yù)洗液放置在低溫產(chǎn)生了沉淀，用前需要加熱到60℃左右使之融化，混勻后再用。

4. 再在離心吸附柱中加入0.3 mL 的通用預(yù)洗液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此步預(yù)洗zui好別省略，否則DNA 純度不高。

5. 在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。

6. 再在離心吸附柱中加入0.7 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此為第二次洗滌。

7. 再在離心吸附柱中加入0.4 mL 的通用洗柱液，室溫12000-15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。此為第三次洗滌，如果不洗滌三次，zui后得到的質(zhì)粒DNA 的OD260 和280 的比值達(dá)不到1.8。

8. 室溫12000-15000 g 離心半分鐘，甩干殘留液體。注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響后續(xù)的電泳上樣（DNA 沉不到加樣孔里去）和酶反應(yīng)。

9. 將離心柱置于一個(gè)新的1.5 mL 自備塑料離心管中，加入30-100 μL DNA洗脫液2.0，室溫放置2 分鐘。如果將DNA 洗脫液2.0 預(yù)熱到65-80℃，則效果更好。

10. 室溫12000-15000 g 離心半分鐘，離心管底部溶液即為質(zhì)粒DNA，可以直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或放冰箱長(zhǎng)期保存。