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成纖維細(xì)胞之人皮膚成纖維細(xì)胞操作程序
發(fā)布時(shí)間：2017-03-08瀏覽次數(shù)：3848返回列表
成纖維細(xì)胞外增殖能力作為衰老生物學(xué)標(biāo)志，廣泛用于衰老研究，成為衰老研究的重要工具。
人皮膚成纖維細(xì)胞操作程序：
1.將手術(shù)切取的皮膚(或小兒包皮)置玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)，用含較高濃度抗生素(常用200～300IU青霉素，200～300μg鏈霉素/ml)的Hank′s液清洗2次。用鋒利的眼科剪，盡可能將皮膚上的脂肪與結(jié)締組織去除干凈;
2.轉(zhuǎn)移上述皮膚至另一玻璃培養(yǎng)皿內(nèi)，用Hank′s液清洗后，吸盡液體。用剪刀將皮膚剪成直徑約1mm大小的組織塊，再用Hank′s液清洗1次，吸干，滴1～2滴小牛血清;
3.將皮膚組織塊接種至涂有鼠尾膠原的玻璃培養(yǎng)瓶(或塑料培養(yǎng)碟)內(nèi)，每平方厘米面積可接種10～15塊組織;
4.翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使有組織塊的一面處于上位，同時(shí)加入適量培養(yǎng)液(見材料與設(shè)備項(xiàng))，25ml的培養(yǎng)瓶可加2～3ml，塞緊瓶塞(若CO2孵箱，用螺口培養(yǎng)瓶，此時(shí)螺帽不要旋得太緊，以便與外界氣體交流)，置37℃溫箱(或含5%CO2的孵箱);
5.2～4小時(shí)后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使組織塊浸沒于培養(yǎng)液中;
6.一般不必每天觀察，因?yàn)榛蝿?dòng)后會(huì)影響組織塊的貼瓶與生長(zhǎng)。10天左右再觀察，若有污染，棄之;若培養(yǎng)液變黃可換液;
7.通常組織塊于1周左右長(zhǎng)出細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面時(shí)可按第二節(jié)中描述的方式傳代。
