高效液相色譜（High Performance Liquid Chromatography）高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。下面就HPLC使用過(guò)程的常出現(xiàn)問(wèn)題及解答。

一、問(wèn)：液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？

答：1.篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或換柱子。

2.存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或換選擇性好的柱子

二、問(wèn)：用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？

答：關(guān)于漂移問(wèn)題：

1.溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

2.流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等

3.柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的平衡

關(guān)于快速變化問(wèn)題

1.流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定

2.泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。

3.流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合

三、問(wèn)：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

答：

1.樣品量不足，解決辦法為增加樣品量 醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理

2.樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子

3.樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器

4.檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。

5.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)

6.檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

7.檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。

8.記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。

9.流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。

10.檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。

四、問(wèn)：我購(gòu)買的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高，請(qǐng)問(wèn)為什么？

答：柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶-常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。

1.拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；

2.把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；

3.將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；

4.換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。

五、問(wèn)：做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？

答：原因可能有：

1.泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理；

2.比例閥失效，換比例閥即可；

3.泵密封墊損壞，換密封墊即可；

4.溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；

5.系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；

6.梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。