下面就詳細(xì)講講熒光定量PCR使用中的一些小技巧

   先介紹熒光定量PCR原理：在PCR產(chǎn)物或引物中用dU 代替dT。UNG對(duì)不含dU的模板無(wú)任何影響。UNG可從單或雙鏈DNA中消除尿嘧啶，而對(duì)RNA中的尿嘧啶和單一尿嘧啶分子則無(wú)任何作用。

  它可以去除任何來(lái)源的污染；UNG處理可以和PCR擴(kuò)增在同一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)進(jìn)行；由于擴(kuò)增產(chǎn)物中有大量dU存在，可徹底消除污染源。
 
  在使用過(guò)程中特別提醒：

  1.要仔細(xì)閱讀儀器使用說(shuō)明書(shū)，這樣可以充分發(fā)揮儀器的性能并避免發(fā)生錯(cuò)誤

  2.程序設(shè)計(jì)完成后，一定要仔細(xì)檢查，以免出錯(cuò)造成損失

  3.常用的程序調(diào)用以前使用過(guò)的正確程序文件

  4.樣品量較小時(shí)，在樣品槽的兩邊各加上兩排8聯(lián)管，這樣可使熱蓋平整，加熱效果好，有利于效果的穩(wěn)定性

  5.在進(jìn)行各種試劑加樣時(shí)，相同的試劑要一起加后再分裝，要用同一只吸液器及同一個(gè)槍頭

  6.加樣完成后，用酶聯(lián)板離心轉(zhuǎn)頭將管離心一下，使反應(yīng)液到管底，因?yàn)榉磻?yīng)液在管壁或管蓋上時(shí)，會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。