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基因擴增儀具體的使用方法
發(fā)布時間:2022-04-20瀏覽次數(shù):1959返回列表
基因擴增儀實際上相當(dāng)于一個率的溫控系統(tǒng),能夠在短時間內(nèi)率的切換PCR酶反應(yīng)所需要的溫度:能夠快速進行溫度切換和調(diào)整對于PCR反應(yīng)來說是很重要的,下面小編講講PCR 擴增儀使用方法,帶有相關(guān)英文指示步驟的操作:
1.手動/機械手式水浴基因擴增如上圖所示,用三個恒溫水浴箱,分別將三個水浴溫度恒定在三個溫度:PCR的高溫變性溫度(如94℃)低溫復(fù)性溫度(如58℃),適溫延伸溫度(如 72℃)。
再用一個裝有PCR標(biāo)本試管的提籃,用手工在不同溫度的水浴箱中依次水浴,標(biāo)本在每個水浴箱中恒溫的時間用秒表計時。
這種方法的特點是:實驗人員勞動強度大,容易因疲勞引起差錯;而優(yōu)點是:設(shè)備簡單,投資少,與自動化基因擴增儀相比,它無須升降溫過程,實驗時間短,試驗接近理想PCR反應(yīng)條件。
事實表明實驗效果還是不錯的,但由于標(biāo)本試管從一個水浴箱往另一個水浴箱移動中要較短暫暴露于空氣中,因此如移動速度不夠快時也會對標(biāo)本形成溫度干擾,影響結(jié)果。
2.自動化控制型定性基因擴增儀
與上述水浴式擴增儀相比,也有人稱該種擴增儀為干式基因擴增儀,它是具代表性的擴增儀,包括后續(xù)介紹的第三代、第四代都是以第二代為基礎(chǔ)集成了定量檢測部分。
3.終點定量/半定量
第二代的定性PCR只能判斷陰性陽性,而無法評價特定核酸的濃度及定量分析,定量PCR至少能達到定性PCR無法實現(xiàn)的下列功能: a.潛伏期病毒濃度探測 b.感染程度 c.致病病原體數(shù)量變化測定 d.抗病物療效評估 e.恢復(fù)期病毒載量檢測
4..實時定量PCR
實時定量QPCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件,構(gòu)成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統(tǒng)。