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PCR儀技術(shù)在法醫(yī)學(xué)中應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間:2013-08-13瀏覽次數(shù):1266返回列表
PCR技術(shù)可以從一滴血、一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量 DNA產(chǎn)物供分析檢驗(yàn)。PCR技術(shù)的應(yīng)用解決了許多以往血清學(xué)方法無(wú)能為力的問(wèn)題,而且離體蛋白質(zhì)在自然界中的穩(wěn)定性遠(yuǎn)不如核酸。所以 DNA的PCR檢驗(yàn)具有獨(dú)到的優(yōu)越性。目前,人們已建立了各種生物樣品如血液、血斑、精液、性交混合物、肌肉、單根毛發(fā)、上皮細(xì)胞、牙齒、骨骼中制備 DNA的實(shí)驗(yàn)方法。
目前PCR技術(shù)的法醫(yī)學(xué)應(yīng)用主要有:
1.VNTR多態(tài)性
該方法擴(kuò)增位點(diǎn)靶基因多態(tài)性串聯(lián)重復(fù)核心序列數(shù)目不同而形成。目前報(bào)道有十幾種,比較成熟的有APOB、PMCT118、P33.6、P33.4、PYNZ22等位點(diǎn)。該方法簡(jiǎn)單,結(jié)
果易分析,缺點(diǎn)是在片段長(zhǎng)度差異較大時(shí),長(zhǎng)片段可能被漏擴(kuò)增,引起錯(cuò)誤判斷。
2.性別鑒定
PCR性別鑒定目前應(yīng)用于各種生物檢材檢驗(yàn)。通過(guò)擴(kuò)增y染色體特異位點(diǎn)鑒定,用Alu序列作對(duì)照,也可以同時(shí)擴(kuò)增x、y染色體特異性片段進(jìn)行鑒定。
3.STR分型檢驗(yàn)
STR為短串聯(lián)重復(fù)序列(Short Tandom Repeat),形成多態(tài)性原理與VNTR相似,只是重復(fù)單位數(shù)3-6bp,片段長(zhǎng)度100-400 bp。STR與VNTR分布也不同,VNTR主要分布在染色體端粒,而STR則存在于整個(gè)基因組,估計(jì)人類(lèi)基因組有50萬(wàn)個(gè)STR位點(diǎn),因此是巨大的遺傳差異研究對(duì)象。
STR位點(diǎn)的突出特點(diǎn)是基因組內(nèi)基因座多,多態(tài)片段短,在生物性檢材個(gè)人識(shí)別鑒定中實(shí)用價(jià)值高,高度腐敗的檢材只要保存了靶DNA,STR位點(diǎn)就可能擴(kuò)增成功。STR的PCR擴(kuò)增時(shí)間短,變性、退火和延伸每步只需30~60S,可在一個(gè)半小時(shí)左右完成30個(gè)循環(huán)。檢測(cè)方法靈敏度高,甚至<1ng模板DNA都可擴(kuò)增出多態(tài)片段。STR的擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)高分辨聚丙烯酰胺凝膠電泳,用等位基因梯階分子量標(biāo)準(zhǔn)物,即可準(zhǔn)確的判斷等位基因長(zhǎng)度??色@得不連續(xù)的基因頻率分布,便于Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)和偶合概率計(jì)算。
1993年在英國(guó)Colin等報(bào)導(dǎo)用復(fù)合擴(kuò)增對(duì)12個(gè)STR位點(diǎn)進(jìn)行研究,總排除率達(dá)1x10-14,表明STR復(fù)合擴(kuò)增可以認(rèn)定同一。
STR在法醫(yī)學(xué)中應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)在于:
(1)操作方便簡(jiǎn)便,通過(guò)多位點(diǎn)累計(jì),可以同一認(rèn)定;
(2)靈敏度高,復(fù)合擴(kuò)增可以節(jié)約檢材;
(3)片段較小,適宜部分降解DNA的擴(kuò)增。
4.線(xiàn)粒體測(cè)序技術(shù)
線(xiàn)粒體是真核細(xì)胞中與 能量代謝有關(guān)的細(xì)胞器,一個(gè)細(xì)胞中線(xiàn)粒體數(shù)的范圍約為1000~10000個(gè),所以線(xiàn)粒體DNA分析比細(xì)胞核DNA分析要靈敏得多,線(xiàn)粒體測(cè)序分析另一特點(diǎn)是可以對(duì)無(wú)核細(xì)胞檢材,如毛干、紅細(xì)胞骨頭、指甲等進(jìn)行分析,而且細(xì)胞核DNA進(jìn)行測(cè)序分析必須用克隆的方法純化出單一的DNA分子才能進(jìn)行測(cè)序分析,而線(xiàn)粒體DNA可直接經(jīng)PCR擴(kuò)增測(cè)序。進(jìn)一步研究表明,線(xiàn)粒體是母系遺傳方式遺傳的,所以一母所生子女應(yīng)有相同的線(xiàn)粒體DNA序列。線(xiàn)粒體多變區(qū)在D區(qū)。擴(kuò)增D區(qū)多態(tài)片段測(cè)序,就可以進(jìn)行個(gè)體識(shí)別。
目前,上大多數(shù)法醫(yī) DNA鑒定實(shí)驗(yàn)室主要工作就是應(yīng)用STR-PCR分型檢驗(yàn)技術(shù)進(jìn)行個(gè)體識(shí)別、親權(quán)鑒定等工作。