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電泳儀的研發(fā)背景與使用技巧
發(fā)布時(shí)間:2018-06-01瀏覽次數(shù):1736返回列表
電泳儀的應(yīng)用雖廣泛,但是有不少用戶對(duì)其了解甚少,以下內(nèi)容主要從電泳儀的研發(fā)背景與使用技巧開始介紹,助大家對(duì)其有個(gè)深入的了解!
一、電泳儀的研發(fā)背景
1937年,瑞典生化學(xué)家Tiselius集前人百余年探索電泳現(xiàn)象之大成,了Tiselius電泳儀,在此基礎(chǔ)上建立了研究蛋白質(zhì)的自由界面電泳方法,利用該法次證明人血清是由白蛋白(A)、α、β、γ球蛋白組成,并因此于1948年獲得阿果獎(jiǎng)。隨后電泳技術(shù)的發(fā)展突飛猛進(jìn),1949年,RicketlsMarrack等人證明人血清蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離可依次分為白蛋白,α1、α2、β、γ球蛋白五個(gè)組分,1957年Reiner對(duì)人血清五個(gè)組分蛋白進(jìn)行了定量分析。
但自由界面電泳沒有固定支持介質(zhì),擴(kuò)散和對(duì)流作用較強(qiáng),影響分離效果,于是在50年代相繼出現(xiàn)了固相支持介質(zhì)電泳。初的支持介質(zhì)是濾紙和醋酸纖維素膜,目前這些介質(zhì)在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)應(yīng)用較少。在很長一段時(shí)間里,小分子物質(zhì)如氨基酸、多肽、糖等通常用濾紙、纖維素或硅膠薄層平板作為介質(zhì)進(jìn)行電泳分離、分析,但目前一般使用靈敏度高的技術(shù)如液相色譜法(HPLC)等來進(jìn)行分析。而對(duì)于復(fù)雜的生物大分子,以濾紙、硅膠或醋酸纖維素膜等作為支持介質(zhì)進(jìn)行電泳,其分離效果并不理想。于是1959年,Raymond和Weintraub,Davis和Ornstein先后利用人工合成凝膠作支持介質(zhì)建立了聚丙烯酰胺凝膠電泳,從而大大提高了電泳的分辨率和分離效果,增強(qiáng)了電泳技術(shù)的發(fā)展、滲透及與其他技術(shù)結(jié)合配套的能力。致使各式各樣的電泳技術(shù)和電泳材料如雨后春筍、競相爭榮,成為當(dāng)代實(shí)驗(yàn)科學(xué)技術(shù)中品種繁多、應(yīng)用廣泛、基礎(chǔ)與技術(shù)皆備的大技術(shù)。
一、電泳儀的使用技巧
1、電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后,禁止人體接觸電、電泳儀電泳物及其它可能帶電部分,也不能到電泳儀電泳槽內(nèi)取放東西,如需要應(yīng)先斷電,以免觸電。同時(shí)要求電泳儀必須有良好接地端,以防漏電。
2、電泳儀通電后,不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭,以防短路現(xiàn)象發(fā)生,雖然電泳儀內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲,但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致電泳儀損壞。
3、由于電泳儀不同介質(zhì)支持物的電阻值不同,電泳儀電泳時(shí)所通過的電流量也不同,其電泳儀泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同,故電泳儀不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。
4、在總電流不超過電泳儀額定電流時(shí)(大電流范圍),可以多槽關(guān)聯(lián)使用,但要注意不能超載,否則容易影響電泳儀壽命。
5、參照實(shí)驗(yàn)要求選擇相應(yīng)規(guī)格型號(hào)的電泳儀,才能確保經(jīng)濟(jì)、耐用、簡單、合理。因?yàn)楦?、低壓電泳儀內(nèi)部結(jié)構(gòu)特征不同,由于高壓電泳儀常附加有多項(xiàng)功能,而且高壓電泳儀不能空載運(yùn)行(容易造成人身傷害、內(nèi)部器件損壞),導(dǎo)致操作上難易程度的不同等。因此正確的選購方法是:“根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求的高電壓,確定購買電泳儀的規(guī)格及型號(hào)”。
6、某些特殊情況下需檢查電泳儀電泳輸入情況時(shí),允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機(jī),但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負(fù)載再開機(jī),否則電壓表指針將大幅度跳動(dòng),容易造成不必要的人為電泳儀損壞。
7、使用過程中發(fā)現(xiàn)電泳儀異?,F(xiàn)象,如較大噪音、放電或異常氣味,須立即切斷電泳儀電源,進(jìn)行檢修,以免發(fā)生意外事故。
8、電泳儀是儀器,在操作過程中要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,但不可避免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的故障,當(dāng)儀器提示有故障時(shí),應(yīng)立即處理。
9、如果電泳儀的輸出電壓U達(dá)不到預(yù)置值,應(yīng)先觀察I或P是否已經(jīng)恒定,或者已經(jīng)達(dá)到電泳儀所規(guī)定的大I或P(JY電泳儀均有明確指示燈標(biāo)志)。如果尚未達(dá)到限值,將已經(jīng)恒定I或P的設(shè)置調(diào)大(有必要的話至限值),才能夠提高電壓輸出。