豬瘟在我國(guó)屬重大動(dòng)物疫病。我國(guó)對(duì)豬瘟防控主要采用豬瘟疫苗免疫的策略，而抗體檢測(cè)是免疫效果評(píng)價(jià)的主要手段。目前，動(dòng)物衛(wèi)生組織推薦的豬瘟抗體檢測(cè)方法是ELISA 檢測(cè)方法和熒光抗體中和試驗(yàn)，而熒光抗體中和試驗(yàn)對(duì)試驗(yàn)條件和操作人員的要求很高，且耗時(shí)長(zhǎng)，僅適合專業(yè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行少量樣本檢測(cè)，不宜推廣應(yīng)用。因此可以說(shuō)，ELISA方法是目前上承認(rèn)的惟一適合大規(guī)模應(yīng)用的豬瘟抗體檢測(cè)方法。
    在進(jìn)行ELISA檢測(cè)方法評(píng)價(jià)時(shí)，重要的兩個(gè)指標(biāo)就是敏感性和特異性，而二者又存在一定的矛盾性。當(dāng)對(duì)一種檢測(cè)方法的敏感性要求較高時(shí)，勢(shì)必會(huì)損失一部分特異性；同樣，當(dāng)特異性要求較高時(shí)，勢(shì)必會(huì)損失一部分敏感性。因此，對(duì)于一個(gè)好的檢測(cè)方法來(lái)說(shuō)，一定要尋找敏感性和特異性佳的平衡點(diǎn)和結(jié)合點(diǎn)。目前，用于豬瘟抗體檢測(cè)的ELISA方法主要有阻斷ELISA和間接ELISA兩種原理。阻斷ELISA使用了單克隆抗體，因此檢測(cè)的特異性高；而間接ELISA則側(cè)重于敏感性。
    阻斷ELISA 和間接ELISA 在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，均具有合理性。但是針對(duì)我國(guó)的大規(guī)模豬瘟強(qiáng)制免疫現(xiàn)狀，如何在不同的應(yīng)用范圍選擇適合的試劑盒就成為一個(gè)重要問(wèn)題。 因此，本文主要介紹間接ELISA試劑盒和進(jìn)口阻斷ELISA試劑盒在臨床應(yīng)用上的對(duì)比研究，幫助讀者在實(shí)際生產(chǎn)中選擇為合適的檢測(cè)試劑。
    試劑盒研制原理的差異
    阻斷試劑盒基于液相阻斷原理，反應(yīng)孔的顏色深淺與血清中的抗體含量成反比。阻斷ELISA采用了單克隆抗體檢測(cè)，可大大提高檢測(cè)的特異性，但實(shí)際檢測(cè)的對(duì)象卻只是針對(duì)單一表位的抗體（檢測(cè)為特異性抗體）。因此，當(dāng)陽(yáng)性血清中針對(duì)該表位抗體豐度不高時(shí)，會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的敏感性降低（出現(xiàn)假陰性結(jié)果）。  
    間接試劑盒基于間接ELISA 原理，反應(yīng)孔顏色深淺與結(jié)合在反應(yīng)板中的特異性抗體的量成正比。由于間接ELISA檢測(cè)的是針對(duì)包被抗原蛋白的多克隆抗體（檢測(cè)為豬體內(nèi)的總抗體），因此會(huì)提高檢測(cè)的敏感性。
    兩種試劑盒與熒光抗體病毒中和試驗(yàn)符合率分析
    熒光抗體病毒中和試驗(yàn)（FVNT）是OIE 推薦方法，為豬瘟抗體檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。有臨床試驗(yàn)表明對(duì)兩種ELISA抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果存在差異的283 份血清樣本采用FVNT的方法進(jìn)行了確認(rèn)檢測(cè)，結(jié)果顯示，間接試劑盒與FVNT 的符合率為69.26%，阻斷試劑盒與FVNT 的符合率為28.62%。不符合樣本的確認(rèn)結(jié)果表明，間接試劑盒能真實(shí)地反映疫苗免疫后的中和抗體水平，而阻斷試劑盒對(duì)陽(yáng)性血清存在明顯的漏檢狀況。
    對(duì)免疫豬血清抗體的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)
    通過(guò)對(duì)免疫豬抗體增長(zhǎng)趨勢(shì)的檢測(cè)結(jié)果看出，豬瘟抗體間接ELISA對(duì)抗體由陰轉(zhuǎn)陽(yáng)的檢出時(shí)間為免疫后的12-15d，而阻斷ELISA試劑盒檢測(cè)表明在免疫后的15-28d陸續(xù)由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性。由于間接ELISA 檢測(cè)的是針對(duì)E2蛋白的所有抗體，而阻斷ELISA檢測(cè)的是針對(duì)E2蛋白某一個(gè)表位的抗體，在免疫初期由于抗體豐度的不同，導(dǎo)致間接ELISA對(duì)陽(yáng)性抗體的檢出要早于阻斷ELISA。說(shuō)明間接ELISA敏感性高，適合免疫后的早期監(jiān)測(cè)，疫苗效力監(jiān)測(cè)和免疫程序的制定。
    對(duì)不同抗體水平的豬血清進(jìn)行有效的區(qū)分
    豬瘟抗體間接ELISA試劑盒可以對(duì)不同抗體水平的豬血清進(jìn)行有效的區(qū)分，可以從IE值上直觀的比較兩份血清抗體水平的高低。間接法試劑盒中所采用的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清為反復(fù)免疫的豬瘟抗體強(qiáng)陽(yáng)性血清，而待檢的免疫血清在免疫后213d達(dá)到高值時(shí)，仍不到陽(yáng)性對(duì)照血清OD值的80%。因此說(shuō)明，間接ELISA試劑盒能夠在寬的范圍內(nèi)對(duì)抗體水平進(jìn)行區(qū)分。而阻斷ELISA試劑盒采用的是阻斷ELISA原理，當(dāng)抗體達(dá)到可以將包被的抗原全部封閉的水平后，就出現(xiàn)了檢測(cè)平臺(tái)期。因此，阻斷ELISA只能在一定范圍內(nèi)對(duì)抗體水平的高低進(jìn)行區(qū)分。
    臨床應(yīng)用
    在進(jìn)行田間大規(guī)模普查時(shí)，需要對(duì)某一地區(qū)，某一群體的整體免疫狀況進(jìn)行分析，因此對(duì)檢測(cè)方法的敏感性要求較高，間接ELISA適合于我國(guó)豬場(chǎng)大規(guī)模豬瘟疫苗普免抗體水平的普查。針對(duì)種豬場(chǎng)豬瘟的凈化，需要對(duì)每頭動(dòng)物的抗體水平進(jìn)行檢測(cè)評(píng)價(jià)的同時(shí)，還要排除其他疫病陽(yáng)性抗體的干擾，因此對(duì)檢測(cè)方法的特異性要求較高，熒光抗體病毒中和試驗(yàn)為金標(biāo)準(zhǔn)。在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，一定要對(duì)試劑盒的質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格的甄選，并且根據(jù)實(shí)際應(yīng)用對(duì)象選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法。

                                                                 （本文內(nèi)容來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除）