萊普特非洲豬瘟檢測熒光定量PCR儀可用于臨床實驗室中利用熒光聚合酶鏈反應(yīng)方法對不同基因進(jìn)行拷貝數(shù)的定量分析。多可配置3個熒光檢測通道，標(biāo)配16孔的檢測通量，可通過內(nèi)置觸屏完成所有實驗操作與結(jié)果分析。小巧的機身設(shè)計，可選配外接電池等特點，體積小，重量輕，易于攜帶，輕松滿足外出實驗的需求。功能強大，可用于相對定量，定量，熔解曲線，陰陽性分析等。內(nèi)置7寸高清電容屏PDA，觸屏操作，簡便快捷。16x0.2ml反應(yīng)模塊，兼容八連排管和單管?？蛇x配外接電池，滿足野外環(huán)境下進(jìn)行實驗的需求。可充分滿足用戶對于小通量實驗以及外出實驗的各種需求簡潔直觀的軟件引導(dǎo)，輕松開啟熒光定量PCR實驗。
    非洲豬瘟檢測熒光定量PCR儀操作步驟：
    1、病毒DNA的提取（使用A盒）
    （1）待檢樣品、陽性對照和陰性對照的份數(shù)總和用n表示，取n個滅菌的1.5 mL離心管，逐管編號。
    （2）每管加入BufferA500mL。
    （3）每管分別加入已處理的待檢樣品、陽性對照、陰性對照各200mL，充分混勻，室溫放置10分鐘。
    （4）取與上述離心管等量的DNase-Free吸附柱和收集管，編號。將離心管中的溶液轉(zhuǎn)移至DNase-Free吸附柱，（為避免堵塞吸附柱，盡量不要吸懸浮雜質(zhì)）。
    （5）用TH-15高速離心機設(shè)置13000 r/min室溫離心30秒。
    （6）棄去收集管液體，將吸附柱放回收集管中。
    （7）吸附柱內(nèi)加入600 μL Buffer B，13000 r/min離心30秒。
    （8）棄去收集管液體，將吸附柱放回收集管中。
    （9）重復(fù)步驟（7），（8）。
    （10）13000 r/min空柱離心2分鐘，去除殘留液。
    （11）將每個吸附柱分別移入新的1.5mL離心管中，向柱中央加入50μL Buffer C，室溫靜置1分鐘，13000 r/min離心30秒，離心管中液體即為模板DNA。獲得的DNA溶液，冰上保存?zhèn)溆茫ㄗ⒁馓崛〉腄NA須在2h內(nèi)進(jìn)行PCR擴增，若需長期保存須放置-80℃冰箱，但應(yīng)避免反復(fù)凍融）。
    2、熒光PCR擴增（使用B盒）
    （1）從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液、Taq酶，室溫融化后，2 000 r/min離心5秒。設(shè)所需PCR管數(shù)為n（n = 樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照），每個測試反應(yīng)體系需要20 μL 熒光PCR反應(yīng)液和0.5 μL Taq酶。計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積小管中，充分混合均勻后，向每個PCR管中各分裝20μL。
    （2）分別向上述PCR管中加入（11）中制備的DNA溶液各5μL，蓋緊管蓋，500 r/min 離心30秒。
    （3）將加樣后的PCR管放入熒光PCR檢測儀內(nèi)，作好標(biāo)記。反應(yīng)參數(shù)設(shè)置：
    di一階段，預(yù)變性95℃/3分鐘
    第二階段，95℃/15秒，52℃/10秒，60℃/35秒共45個循環(huán)。熒光收集在第二階段每次循環(huán)的60℃延伸時進(jìn)行。