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北京萊普特PCR擴增儀的使用
發(fā)布時間:2017-05-15瀏覽次數(shù):1857返回列表
導(dǎo)讀:北京萊普特PCR擴增儀被廣泛地運用在醫(yī)學和生物學的實驗室,例如用于判斷檢體中是否會表現(xiàn)某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復(fù)制,以及親子鑒定。知曉北京萊普特PCR擴增儀的使用原理才能好的操作它。
北京萊普特PCR擴增儀的工作原理
類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:
①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準備;
②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;
③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得多的“半保留復(fù)制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。
北京萊普特PCR擴增儀操作步驟
1. 在0.2mlEppendorf管內(nèi)配制反應(yīng)體系:
2. 打開電源開關(guān)
3. 選擇new進入編程操作
4. 按下列程序進行編程: (1) 94℃預(yù)變性5min;(2) 94℃變性50sec; (2) 55℃退火50sec;(4) 72℃延伸10 sec;
5. (5)重復(fù)步驟②-④30次;(6) 72℃徹底延伸10min
6. 從file菜單中,調(diào)取程序;
7. 按回車鍵確認后,按照提示輸入相應(yīng)的配制反應(yīng)體系體系;
8. 啟動程序;
9. 程序結(jié)束后,取出Eppendorf管。
10. 電泳檢測PCR結(jié)果。
北京萊普特PCR擴增儀保養(yǎng)
1.樣品池的清洗先打開蓋子,然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸干剩余液體;打開PCR儀,設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運行,讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5~10min即可。
2.熱蓋的清洗對于熒光定量PCR儀,當有熒光污染出現(xiàn),而且這一污染并非來自樣品池時,或當有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時,需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面,確保樣品池的孔干凈,無污物阻擋光路。
3.儀器外表面的清洗清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂,但達不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進行清洗。
4.換保險絲先將PCR儀關(guān)機,拔去插頭,打開電源插口旁邊的保險盒,換上備用的保險絲,觀察是否恢復(fù)正常。