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檢測(cè)大腸桿菌怎能少了檢測(cè)儀器!
發(fā)布時(shí)間:2019-08-05瀏覽次數(shù):2039返回列表
大腸桿菌是動(dòng)物腸道中的正常寄居菌,其中很小一部分在一定條件下引起疾病 。大腸桿菌的血清型能夠引起人體或動(dòng)物胃腸道感染,主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的,除胃腸道感染以外,還會(huì)引起尿道感染、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎以及敗血型感染等。檢測(cè)大腸桿菌怎能少了檢測(cè)儀器!可以使用專門的大腸桿菌檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)。
1、ATP生物發(fā)光技術(shù)
ATP生物發(fā)光技術(shù)是近些年來(lái)發(fā)展較快的微生物快速檢測(cè)方法。ATP是活細(xì)胞中zui普遍的能量代謝產(chǎn)物,為細(xì)胞提供各種生理活動(dòng)所需的能量,而且其在生物體內(nèi)含量維持在一定的范圍內(nèi)。ATP含量檢測(cè)的一種方法是熒光光度法,生物發(fā)光是活細(xì)胞在熒光素酶催化下發(fā)出的熒光。目前使用的熒光素酶主要來(lái)源于北美的螢火蟲,相對(duì)分子質(zhì)量為62000的蛋白質(zhì),它可以催化熒光素的氧化反應(yīng),這種反應(yīng)的終產(chǎn)物不穩(wěn)定,很快分解產(chǎn)生熒光。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,不同之處在于幾分鐘內(nèi)便可獲得檢測(cè)結(jié)果,而且熒光光度計(jì)是便攜式的,使用非常方便,適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),這種技術(shù)可以用于檢測(cè)微小的污染物水平以及食品加工設(shè)備及其表面的清潔程度的檢測(cè)。
2、 自動(dòng)化儀器
自動(dòng)免疫測(cè)定分析儀誕生于20世紀(jì)70年代。隨著科技的發(fā)展,自動(dòng)免疫測(cè)定分析儀在各領(lǐng)域的應(yīng)用也越來(lái)越多,該儀器使用簡(jiǎn)單,無(wú)太多操作干擾,既省時(shí)省力,又大大提高了檢測(cè)的度和靈敏度。
這種自動(dòng)酶標(biāo)免疫測(cè)試系統(tǒng)目前在外是酶免疫自動(dòng)化系統(tǒng)中應(yīng)用zui為廣泛的一種。但是由于與其配套的試劑昂貴,從而限制了其在基層實(shí)驗(yàn)室的使用。
3、基因芯片技術(shù)
基因芯片技術(shù)(gene chip)是20世紀(jì)90年代興起的生物技術(shù),也叫DNA微陣列(DNA mi―croarray)。采用原位合成(in situ synthesis)或顯微打印方法,將數(shù)以萬(wàn)計(jì)的DNA探針固化在支持物表面,產(chǎn)生二維DNA探針陣列,接著與標(biāo)記的樣品進(jìn)行雜交,通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)生物樣品快速、并行、地檢測(cè),由于它常用硅芯片作為固相支持物,而且制備中運(yùn)用了計(jì)算機(jī)芯片的制備技術(shù),所以稱為基因芯片技術(shù)。
基因芯片可以對(duì)食品中的致病菌實(shí)行高通量和平行檢測(cè),一次實(shí)驗(yàn)就可以得出全部檢測(cè)結(jié)果。另外整個(gè)檢測(cè)在很短時(shí)間內(nèi)即可得出檢測(cè)結(jié)果,且敏感性高,特異性強(qiáng)。但是也有一些問(wèn)題:目前的基因芯片一般都采用熒光標(biāo)記,因此需要昂貴的芯片制作系統(tǒng)以及激光共聚焦掃描儀,另外操作過(guò)程對(duì)工作人員要求有很高的專業(yè)素質(zhì)等等。所以基因芯片的制備技術(shù)限制其應(yīng)用而且還需改進(jìn)。
4、PCR檢測(cè)技術(shù)
聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)即PCR(polymerase chain reaction),該技術(shù)是在1971年先被Kleppe等提出,1985年才作為一種檢測(cè)方法獲得認(rèn)可。PCR檢測(cè)技術(shù)是一種聚合酶鏈反應(yīng),其采用變性―退火―延伸三個(gè)步驟使DNA基因能夠在體外實(shí)現(xiàn)解旋解鏈,類似于一種體外增加、復(fù)制形式。理論上可在2h內(nèi)將一個(gè)DNA分子擴(kuò)增到106~109倍,采用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光條帶。
目前PCR技術(shù)廣泛用于生命科學(xué)的許多學(xué)科中。在食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域,PCR可用于快速檢測(cè)食品中的微生物含量。常用的主要有免疫PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、多重PCR、反轉(zhuǎn)錄PCR和實(shí)時(shí)定量PCR等。史云等建立了用于肉及肉制品中大腸桿菌的兩重PCR檢測(cè)方法,但該方法需要較長(zhǎng)的時(shí)間的樣品純化處理,且對(duì)操作人員的專業(yè)知識(shí)的要求也較高。
5、生物傳感器檢測(cè)技術(shù)
生物傳感器主要是以生物化學(xué)傳感技術(shù)為基礎(chǔ),用抗體、酶、細(xì)胞等作為識(shí)別元件,并與信號(hào)轉(zhuǎn)換器和電子測(cè)量?jī)x聯(lián)合構(gòu)成的一種分析工具。目前已經(jīng)成熟的商品化的傳感器有免疫傳感器、酶?jìng)鞲衅?、DNA雜交傳感器、微生物傳感器、分子印跡傳感器等。生物傳感器具有諸多優(yōu)點(diǎn),如高靈敏度、高選擇性、較好的穩(wěn)定性、低成本、且能在復(fù)雜的體系中快速在線監(jiān)測(cè)。
現(xiàn)在用于信號(hào)傳導(dǎo)的方法有表面聲波傳導(dǎo)、電氣化學(xué)方法和光學(xué)傳導(dǎo)法。用于食品微生物檢測(cè)的主要是免疫傳感器和基因傳感器,原理是利用DNA雜交和抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè),再將其轉(zhuǎn)換為光信號(hào)或電信號(hào)并通過(guò)儀器放大輸出。生物傳感器的分子識(shí)別元件的載體可采用多種材料,利用較多的是光纖、熒光光度計(jì)等。
6、氣相色譜(GC)和液相色譜法(HPLC)
氣相色譜法主要是將大腸桿菌經(jīng)過(guò)一系列衍生化的前處理后,為接下來(lái)的分析研究提供盡可能多的化學(xué)組分。大腸桿菌的污染程度可以用頂空氣相色譜法來(lái)分析,其原理是利用食品密封系統(tǒng)頂部的微生物代謝產(chǎn)物CO2對(duì)微生物進(jìn)行分析。這種方法對(duì)食品質(zhì)量安全檢測(cè)有重大意義。與上述傳統(tǒng)技術(shù)相比,此種方法具有檢測(cè)速度快、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。
液相色譜法(HPLC)主要是根據(jù)離子配對(duì)反相層析的原理來(lái)分析核酸。HPLC主要是針對(duì)DNA片段分離。長(zhǎng)鏈DNA所攜帶的磷酸基團(tuán)比較多,因此會(huì)有更多的TEAA與之相融合,其在柱內(nèi)停留的時(shí)間增加。因?yàn)橐译婢哂杏H水性,可以通過(guò)其而將DNA分離,在具備一定的變性溫度下,可以通過(guò)圖譜顯示明顯的吸收峰。該技術(shù)具有準(zhǔn)確度高、靈敏度高、成本低等優(yōu)點(diǎn),可大大提高工作效率。
7、免疫磁珠技術(shù)(IMS)
免疫磁珠技術(shù)是一種大腸桿菌的分離技術(shù)。其原理是以磁珠為抗體載體,磁珠和大腸桿菌結(jié)合,通過(guò)磁力來(lái)實(shí)現(xiàn)力學(xué)移動(dòng)進(jìn)而將大腸桿菌進(jìn)行分離。與其他的細(xì)菌分離方法相比,免疫磁珠技術(shù)在很大程度上提高了樣本中病原性副溶血性弧菌的檢測(cè)效率。
免疫磁珠技術(shù)可以快速地在不同菌種的樣本中處理不同的微生物,該方法可以大幅度地提升檢測(cè)效率。
大腸桿菌檢測(cè)儀,比傳統(tǒng)檢測(cè)飲用水、污染水、地表水、水處理及再生水的MF或MTF方法更加便捷,數(shù)據(jù)更可靠;不需要復(fù)雜、昂貴的實(shí)驗(yàn)室器材和專業(yè)人員即可現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試,而且簡(jiǎn)單方便,操作方法更容易掌握;現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試減少了由于運(yùn)輸及保持時(shí)間引起的誤差,這樣可確保準(zhǔn)確采樣;在沒有實(shí)驗(yàn)室的偏遠(yuǎn)地方也可進(jìn)行可靠的測(cè)試;使水資源和健康可以進(jìn)行隨時(shí)隨地考察,從而大大降低了攜帶冷凝器及運(yùn)輸樣品至實(shí)驗(yàn)室的不便。