色譜法的zui早應(yīng)用是用于分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時(shí)，玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動(dòng)，并逐漸分開(kāi)成幾個(gè)不同顏色的譜帶，繼續(xù)沖洗就可分別接得各種顏色的色素，并可分別進(jìn)行鑒定。色譜法也由此而得名。但其分離的原理仍然是一樣的。我們?nèi)匀唤兴V分析。色譜儀作為一種高儀器，對(duì)于使用方面當(dāng)然要求比較高嘍，接下來(lái)滕州浩瀚與您分享液相色譜儀干貨！色譜法的zui早應(yīng)用是用于分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時(shí)，玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動(dòng)，并逐漸分開(kāi)成幾個(gè)不同顏色的譜帶，繼續(xù)沖洗就可分別接得各種顏色的色素，并可分別進(jìn)行鑒定。色譜法也由此而得名。但其分離的原理仍然是一樣的。我們?nèi)匀唤兴V分析。色譜儀作為一種高儀器，對(duì)于使用方面當(dāng)然要求比較高嘍，接下來(lái)滕州浩瀚與您分享液相色譜儀干貨！色譜法的zui早應(yīng)用是用于分離植物色素，其方法是這樣的：在一玻璃管中放入碳酸鈣，將含有植物色素（植物葉的提取液）的石油醚倒入管中。此時(shí)，玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗，隨著石油醚的加入，譜帶不斷地向下移動(dòng)，并逐漸分開(kāi)成幾個(gè)不同顏色的譜帶，繼續(xù)沖洗就可分別接得各種顏色的色素，并可分別進(jìn)行鑒定。色譜法也由此而得名。但其分離的原理仍然是一樣的。我們?nèi)匀唤兴V分析。色譜儀作為一種高儀器，對(duì)于使用方面當(dāng)然要求比較高嘍，接下來(lái)滕州浩瀚與您分享液相色譜儀干貨！
一、使用注意事項(xiàng)
1、開(kāi)啟輸液泵后，應(yīng)放空泵的輸出端，排除泵體內(nèi)的氣泡再與進(jìn)樣閥、色譜柱相接，方能使流速穩(wěn)定。
2、次使用的色譜柱或進(jìn)樣過(guò)高濃度樣品的色譜柱，應(yīng)在設(shè)置流量下，將柱出口放空，老化數(shù)小時(shí)后，再與檢測(cè)器的流通池輸入端相連接。
3、開(kāi)啟柱箱溫度控制器后，應(yīng)注意色譜柱的zui高使用溫度，防止過(guò)溫。
4、檢測(cè)器開(kāi)啟后，請(qǐng)勿帶電搬動(dòng)位置，防止機(jī)內(nèi)氘燈損壞。
5、流通池流出的廢液必須集中收集處理，防止污染環(huán)境。
6、必須使用平頭專(zhuān)用注射針進(jìn)入樣品，嚴(yán)禁使用普通針尖針頭進(jìn)樣。若進(jìn)樣量小于定量管的容量時(shí),可使用微量平口注射器注入六通閥后(不要拔出注射器)，立即轉(zhuǎn)動(dòng)六通閥，完成一次進(jìn)樣。
7、當(dāng)信號(hào)電壓超過(guò)1V或滿(mǎn)量程信號(hào)超過(guò)量程范圍時(shí)，有可能出現(xiàn)“平頭峰”，其積分面積及保留時(shí)間會(huì)產(chǎn)生很大的誤差，此時(shí)應(yīng)稀釋樣品或擴(kuò)大量 程范圍后再 進(jìn)樣。
二、流動(dòng)相溶劑瓶的保養(yǎng)
溶劑瓶是流動(dòng)相的起點(diǎn)，通常是盛放水相溶液或是有機(jī)相溶液。
1、水相溶液
對(duì)于水相溶液來(lái)說(shuō)，要的問(wèn)題是防止污染。雖然液相用的水大都經(jīng)過(guò)殺菌處理，但是細(xì)菌的生命力很頑強(qiáng)，在適當(dāng)?shù)臏囟群凸庹涨闆r下，它們就會(huì)活躍起來(lái)，如果在流動(dòng)相里加入磷酸鹽一類(lèi)的添加劑，它們是如虎添翼。所以，對(duì)于溶劑瓶我們要做的非常重要的工作就是勤換流動(dòng)相，常換常新。
2、有機(jī)相溶液
對(duì)于有機(jī)相溶液，可以不用擔(dān)心細(xì)菌繁殖的問(wèn)題。但是有機(jī)相容易發(fā)生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下易發(fā)生聚合，瓶子里就會(huì)出現(xiàn)一些絮狀的聚合沉淀物。為了防止聚合過(guò)程的發(fā)生，裝乙腈時(shí)要用棕色的溶劑瓶，避免陽(yáng)光直射，換乙腈時(shí)應(yīng)當(dāng)棄去瓶底剩余的溶液。
3、清洗過(guò)濾
溶劑瓶里的過(guò)濾頭，其作用是為了防止溶液瓶中的顆粒雜質(zhì)進(jìn)入到儀器的流路系統(tǒng)中，它的材質(zhì)通常分為玻璃燒結(jié)石英和不銹鋼，如果不慎堵塞會(huì)造成流動(dòng)相吸液不暢，因此必須進(jìn)行清洗，玻璃材質(zhì)的通常是用稀硝酸泡，而不銹鋼材質(zhì)的可以直接進(jìn)行超聲清洗。
4、流動(dòng)相的脫氣
脫氣的目的是為了除去流動(dòng)相中溶解的氣體，使色譜泵的輸液準(zhǔn)確，保留時(shí)間和色譜峰面積再現(xiàn)性提高;使基線(xiàn)穩(wěn)定，信噪比增加，防止氣泡引起尖峰，從而提高檢測(cè)器性能;減少死體積，防止填料氧化，從而保護(hù)色譜柱。目前常用的脫氣方法有以下4種。
(1) 氦氣脫氣法:利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高；
(2) 加熱回流法:效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染；
(3) 真空脫氣法:易抽走有機(jī)相；
(4) 超聲脫氣法:流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10～15min，此方法效果較差，但操作簡(jiǎn)單。實(shí)際工作中，超聲脫氣法操作簡(jiǎn)單，仍被廣泛應(yīng)用，雖然此方法有時(shí)會(huì)引起氣體溶解度的增加，但基本上能滿(mǎn)足日常分析操作的要求。
三、常見(jiàn)故障及處理
1、柱壓高原因
（1）緩沖液鹽分如（乙酸銨等）沉積于柱內(nèi)。
（2）樣品污染沉積。處理對(duì)于種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)提高流速?zèng)_洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；對(duì)于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定），再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。
2、氣泡溢出
流動(dòng)相內(nèi)有氣泡，關(guān)閉泵，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purg鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，進(jìn)入流動(dòng)相，無(wú)論打開(kāi)purge鍵幾次，都無(wú)法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過(guò)濾器長(zhǎng)期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過(guò)濾器內(nèi)部由于霉菌的生長(zhǎng)繁殖，形成菌團(tuán)，阻塞了過(guò)濾器，緩沖液難以流暢地通過(guò)過(guò)濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過(guò)濾器進(jìn)入流動(dòng)相。處理過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可；亦可將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時(shí)，輕輕震蕩幾次，再將過(guò)濾器用純水清洗幾次，打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過(guò)濾器冒出，繼續(xù)將過(guò)濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒(méi)有氣泡不斷從過(guò)濾器中冒出，說(shuō)明過(guò)濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞，流動(dòng)相可以流暢地通過(guò)過(guò)濾器。打開(kāi)泄壓閥，打開(kāi)泵，流速調(diào)1.0～3.0mL/min，純水沖洗過(guò)濾器1小時(shí)左右。即可將過(guò)濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時(shí)即可。
3、壓力波動(dòng)大，流量不穩(wěn)定
原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀(guān)察流動(dòng)相的量，不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底，避免吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。
4、出峰不，峰分叉
（1）色譜柱被污染。
（2）柱頭填料塌陷。處理對(duì)于種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇（4+6）沖洗柱子（沖洗時(shí)間的長(zhǎng)短由樣品污染的情況而定），再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如，沖洗后依然出峰不，則考慮第二種情況。對(duì)于第二種情況，擰開(kāi)柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分（污染的填料），裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直裝滿(mǎn)填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。
5、峰面積重復(fù)性不
（1）進(jìn)樣閥漏液。
（2）加樣針不到位。
（3）液量不足。處理對(duì)于種情況換進(jìn)樣閥墊圈；對(duì)于第二種情況加樣針插到底，注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJECT狀態(tài)，以進(jìn)樣量的準(zhǔn)確。日常工作中，液相色譜儀的保養(yǎng)非常重要，如要注意不要讓空氣進(jìn)入輸液系統(tǒng)和高壓泵中，儲(chǔ)液器內(nèi)的溶液如長(zhǎng)時(shí)間未用應(yīng)清洗儲(chǔ)液器并換溶液，每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈，防止無(wú)機(jī)鹽析出或沉積；樣品的前處理也很重要，任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì)，完全溶解，盡量減少對(duì)色譜柱的污染，以延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，同時(shí)避免注射過(guò)濃的樣品溶液，以免殘留液在進(jìn)樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞；色譜柱作好標(biāo)記，用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。
6、既無(wú)壓力指示，又無(wú)液體流過(guò)
（1）泵密封墊圈磨損。
（2）大量氣泡進(jìn)入泵體。處理對(duì)于種情況，換密封墊圈；對(duì)于第二種情況，在泵作用的同時(shí)，用一個(gè)50mL的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

                                                                                     （本文內(nèi)容來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除）