上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司，是一家專(zhuān)注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高科技企業(yè)，是國(guó)內(nèi)代理銷(xiāo)售生物試劑、儀器的知名公司之一。公司本著為顧客服務(wù)、為科研服務(wù)的宗旨，為中國(guó)的專(zhuān)家和學(xué)者提供種類(lèi)齊全的高品質(zhì)產(chǎn)品。希美公司已與多家歐美著名生物技術(shù)公司簽訂獨(dú)家或區(qū)域代理協(xié)議，銷(xiāo)售的實(shí)驗(yàn)儀器、消耗品、分子生化試劑、免疫試劑和細(xì)胞培養(yǎng)試劑等，已被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、開(kāi)發(fā)應(yīng)用、制藥、疾病診斷與控制、人口與健康、生物技術(shù)等諸多領(lǐng)域?？蛻?hù)遍布大學(xué)、研究所、醫(yī)院、衛(wèi)生防疫、商品檢驗(yàn)檢疫、制藥公司、生物技術(shù)公司和食品工業(yè)等單位。主要產(chǎn)品包括：英國(guó)Randox-lifesciences公司的藥物殘留ELISA試劑盒、抗體抗體蛋白;挪威Biosese公司的檢測(cè)表面活性劑、農(nóng)藥殘留、毒素、PCB等相關(guān)有害物質(zhì)的ELISA檢測(cè)試劑盒以及魚(yú)類(lèi)蛋白和抗體;Gibco公司DMEM培養(yǎng)基、1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基，MEM培養(yǎng)基、F10培養(yǎng)基等;Prospec-Tany公司的細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、蛋白激酶、重組和天然蛋白、酶以及病毒抗原和抗體;美國(guó)eBioscience公司的流式細(xì)胞術(shù)產(chǎn)品等。

　　高創(chuàng)的宗旨是：為用戶(hù)提供“最高質(zhì)量的產(chǎn)品” 和 “最優(yōu)質(zhì)的服務(wù)”。

人維生素C(VC)ELISA kit Human Vitamin C,VC ELISA Kit
人維生素B6(VB6)ELISA Kit Human Vitamin B6,VB6 ELISA Kit
人白三烯B4(LTB4) ELISA Kit Human Leukotriene B4,LT-B4 ELISA Kit
人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA Kit Human intestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISA Kit
人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA Kit Human oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit
人維生素D(VD)ELISA Kit Human Vitamin D,VD ELISA Kit
人維生素B12(VB12)ELISA Kit Human Vitamin B12,VB12 ELISA Kit
人維生素D3(VD3)ELISA Kit Human Vitamin D3,VD3 ELISA kit
人維生素D2(VD2)ELISA Kit Human Vitamin D2,VD2 ELISA Kit
人維生素E(VE)ELISA Kit Human Vitamin E,VE EELISA Kit
人維生素A(VA)ELISA Kit Human Vitamin A,VA ELISA Kit
人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)ELISA Kit Human Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 1,MPIF-1 ELISA Kit
 

人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中MPIF-1含量。

實(shí)驗(yàn)原理
用純化的MPIF-1抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的MPIF-1抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MPIF-1呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制
1、 酶標(biāo)板：一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為20 U/L，然后做系列倍比稀釋(注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)，分別配制成20 U/L，10 U/L，5 U/L，2.5 U/L，1.25 U/L，0.625 U/L，0.312 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制10 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml (不要少于0.5ml )20 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
6、 檢測(cè)溶液A：1×120  /瓶(1:100)。臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋(如：10ul檢測(cè)溶液A / 990 檢測(cè)稀釋液A)，充分混勻，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100 /孔)，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制  0.1-0.2ml。
7、 檢測(cè)溶液B：1×120  /瓶(1:100)。臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
8、 底物溶液：1×10ml/瓶。
9、 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液：1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。
11、覆膜：5張
12、使用說(shuō)明書(shū)：1份

自備物品
1、 酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
2、 微量加液器及吸頭，EP管
3、 蒸餾水或去離子水，濾紙

標(biāo)本的采集及保存
1、 血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4 過(guò)夜后于1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于 1000 g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、 其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000 g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保    存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4、 樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10倍，如：稀釋10倍，取100uL血清或血漿加入900uL樣品稀釋液。標(biāo)本使用0.1 M 的PBS稀釋( PH=7.0-7.2)。
 
注：以上標(biāo)本均應(yīng)密封保存，4 保存應(yīng)小于1周，-20 不應(yīng)超過(guò)1個(gè)月，-80 不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月；標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

操作步驟
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?100  ，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 ，注意不要有氣泡，加樣 時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37 溫育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效
性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100 (臨用前配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。
3、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400 /每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4、 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(臨用前配制)100 ，加上覆膜，37 溫育1小時(shí)。
5、 棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90 ，酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色(反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯時(shí)，即可終止)。
7、 每孔加終止溶液50 ，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物    液的加入順序相同。
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。

注：
1、 試劑準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書(shū)要求保存試劑。實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。
2、 加樣：加樣或加試劑時(shí)，一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
3、 溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。
4、 洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5、 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配制使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)精確 配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10 )，以避免由于不準(zhǔn)確稀  釋而造成濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液。
6、 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，每隔10分鐘)，如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過(guò)強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7、 底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    
洗板方法
1、 手工洗板方法：將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
2、 自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。

特異性
    本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人MPIF-1，且與其它相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。

計(jì)算
  各標(biāo)準(zhǔn)品及樣本  值扣除空白孔  值后作圖(七點(diǎn)圖)，如設(shè)置復(fù)孔，則 應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo))， 值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo))，在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專(zhuān)業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析，如 curve expert 1.3，根據(jù)樣品 值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式，將樣品的  值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

說(shuō)明
1. 在儲(chǔ)存及孵育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染，試劑避免受到微生物的污染，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí)，一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且，洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn)。
4. 濃洗滌液會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
6. 中、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
8. 有效期：6個(gè)月