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如何選擇合適DEAE-5PWToyopearl凝膠填料?
發(fā)布時(shí)間:2018-11-02瀏覽次數(shù):1637返回列表
北京綠百草科技發(fā)展有限公司常年供應(yīng)DEAE-5PWToyopearl凝膠填料。做分離純化工作的人都知道,作為凝膠柱層析中的關(guān)鍵一環(huán),選擇合適的填料是至關(guān)重要的。那么,該如何選擇合適DEAE-5PWToyopearl凝膠填料呢?
1、若對(duì)目標(biāo)蛋白的特性或樣品成分不太了解,可嘗試幾種不同的純化方法:
(1)使用zui通用的凝膠過(guò)濾方法,選擇分離范圍廣闊的介質(zhì)如Superose、Sephacryl HR依據(jù)分子量將 樣品分成不同組份。
(2)用含專一配體或抗體的親和層析介質(zhì)結(jié)合目標(biāo)蛋白。亦可用各種活化偶聯(lián)介質(zhì)偶聯(lián)目標(biāo)蛋白的底物、受體等自制親和介質(zhì),再用以結(jié)合目標(biāo)蛋白。一步即可得到高純度樣品。
(3)體積大的樣品,往往使用離子交換層析加以濃縮及粗純化。高鹽洗脫的樣品,可再用疏水層析純化。疏水層析利用高鹽吸附、低鹽洗脫的原理,洗脫樣品又可直接上離子交換等吸附性層析。兩種方法常被交替使用于純化流程中。
2、當(dāng)目標(biāo)蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時(shí),可用PAGE電泳方法或?qū)游龇椒右詼y(cè)定。分離范圍廣闊的Superose HR預(yù)裝柱很適合測(cè)定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質(zhì)在多個(gè)含不同PH緩沖液的試管中,可簡(jiǎn)易地測(cè)出PI,并選擇純化用緩沖液的zui佳PH。