冰凍切片組織三磷酸腺苷酶活性染色試劑盒

  產(chǎn)品說(shuō)明書

  主要用途

  冰凍切片組織三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性染色試劑是一種旨在使用鈣激活技術(shù)，在堿性條件下，由三磷酸腺苷酶催化水解產(chǎn)生的磷酸與鈣離子結(jié)合，經(jīng)過(guò)氯化鈷的替換，zui后在硫化銨存在的情況下，呈現(xiàn)組織樣本中酶活性部位的棕黑色沉淀現(xiàn)象的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動(dòng)物組織冰凍切片的酶活性檢測(cè)。也可用于人體肌肉組織纖維的分型鑒定。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。

  三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及無(wú)機(jī)磷的反應(yīng)，這一反應(yīng)放出大量能量，用于運(yùn)送離子進(jìn)出細(xì)胞，同時(shí)供給生物體進(jìn)行需能生命過(guò)程。它存在于生物細(xì)胞的多個(gè)部位，比如細(xì)胞質(zhì)膜上和葉綠體類囊體膜上等，對(duì)整個(gè)生命的維持有著重要的作用。膜結(jié)合ATP酶存在多種形式：鈉鉀ATP酶、胞膜鈣泵ATP酶(plasma membrane calcium ATPase;PMCA)或肌質(zhì)網(wǎng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣泵ATP酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases;SERCA)、氫鉀ATP酶(hydrogen/potassium ATPase)或胃質(zhì)子泵(gastric proton pump)等。

  產(chǎn)品內(nèi)容

  堿性液(Reagent A) 毫升

  反應(yīng)液(Reagent B) 毫升

  激活液(Reagent C) 毫升

  置換液(Reagent D) 毫升

  清理液(Reagent E) 毫升

  顯色液(Reagent F) 毫升

  產(chǎn)品說(shuō)明書 1份

  保存方式

  保存反應(yīng)液(Reagent B)在-20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，避免光照;其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

  用戶自備

  培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育

  小型染色缸：用于染色清洗操作

  光學(xué)顯微鏡：用于染色后觀察分析1或

  酶法冰凍切片人體肌肉組織分型染色試劑盒

  酶法冰凍切片動(dòng)物肌肉組織分型染色試劑盒

  實(shí)驗(yàn)步驟

  實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒里的反應(yīng)液(Reagent B)從-20℃的冰箱里取出，放進(jìn)冰槽里融化，避免光照。然后進(jìn)行下列操作： 一、 樣本激活處理

  1.取出待測(cè)的 5 至 10 微米厚的冰凍組織切片(注意：參見(jiàn)注意事項(xiàng) 3 和 4)

  2.小心加上 xx 微升 堿性液(Reagent A)在切片上，鋪滿整個(gè)樣品表面

  3.小心移去 堿性液(Reagent A)

  4.小心加上 xx 微升 反應(yīng)液(Reagent B)，鋪滿整個(gè)樣品表面

  5.放進(jìn) 37℃培養(yǎng)箱里，孵育 30 分鐘

  6.小心移去 反應(yīng)液(Reagent B)

  7.小心加上 xx 微升 激活液(Reagent C)，鋪滿整個(gè)樣品表面

  8.室溫下孵育 2 分鐘

  9.小心移去激活液(Reagent C)

  10.重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟 7 至 9 二次

  二、樣本染色處理

  1. 小心加上x(chóng)x微升置換液(Reagent D)，鋪滿整個(gè)樣品表面

  2. 室溫下孵育2分鐘

  3. 小心移去置換液(Reagent D)

  4. 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液(Reagent E)中孵育1分鐘

  5. 小心移去切片上的清理液(Reagent E)

  6. 小心加上x(chóng)x微升顯色液(Reagent F)，鋪滿整個(gè)樣品表面

  7. 室溫下孵育30至60秒;或直至可見(jiàn)棕黑色

  8. 小心移去顯色液(Reagent F)

  9. 室溫下，小心將切片置入xx毫升清理液(Reagent E)中孵育2分鐘

  10.小心移去切片上的清理液(Reagent E)

  三、 (選擇步驟)樣本復(fù)染處理

  1. 樣本復(fù)染處理(蘇木素)

  2. 放上蓋玻片或封片

  3. 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：酶活性陽(yáng)性部位呈現(xiàn)深淺不一的棕黑色(如果復(fù)染，則細(xì)胞核為藍(lán)色)

  注意事項(xiàng)

  1. 本產(chǎn)品為50次操作

  2. 操作時(shí)，須帶手套

  3. 建議組織快速冷凍，避免切片冰晶形成

  4. 冰凍切片不可固定處理

  5. 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面

  6. 本產(chǎn)品可以用于鑒定人體肌肉纖維I型和II型：淺染為I型;深染為II型。如果需要進(jìn)一步鑒定亞型或動(dòng)物肌肉纖維分型，建議使用

  7. 組織細(xì)胞染色注意不要過(guò)度

  8. 可以使用有機(jī)溶劑(乙醇、二甲苯等)脫水、澄清處理后封片

  9. 組織細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察

  10.本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

  質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

  1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

  2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

  染色試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒