人真皮成纖維細胞的分離培養(yǎng)制備方式

  真皮成纖維細胞屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細胞。細胞來源于人正常的皮膚組織，真皮成纖維細胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細胞，由于這些細胞非常容易培養(yǎng)，它們已經(jīng)被廣泛用于細胞和分子生物學研究中。

  一般而言，成纖維細胞能夠分泌I型和III型膠原等細胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。傷口修復時，真皮成纖維細胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質(zhì)的表型，同時，它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應對修復時的炎癥反應。

  以下是提供的一種人真皮成纖維細胞的制備方式(僅供參考)：

  1.首先在分離真皮成纖維細胞時要做到在無菌條件下進行，打開生物安全柜紫外燈30min作無菌處理。

  2.將手術廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精，消毒2min，

  3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍，

  4.然后用眼科剪除去脂肪及結(jié)締組織等，

  5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊，放入dish中，加0.1%的dispase溶液，封口膜封口，4℃冰箱過夜消化，

  6.第二天，用鑷子將表皮與真皮分開(薄的那層是表皮，厚的那層是真皮)，

  7.將真皮剪碎，移至離心管，用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h(視消化程度而定)，

  8.用100 μm網(wǎng)篩過濾，

  9.取濾液，300 g，離心5 min，

  10.用完全培養(yǎng)基重懸沉淀，

  11.鋪瓶，

  12.隔天換液。

  以上是皮膚成纖維細胞分離培養(yǎng)的一種方式，不同的技術人員分離培養(yǎng)的方法也不同，使用的試劑比例也不盡相同，皮膚成纖維細胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達檢測，采用細胞免疫熒光技術。細胞純度可高達于90%，所有的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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