ELISA試劑盒將出現(xiàn)假陽性結(jié)果

  根據(jù)以上敘述可以看出，在這種方法中陰性對照和陽性對照也起到試驗的質(zhì)控作用，試劑變質(zhì)和操作不當(dāng)均會產(chǎn)生"試驗無效"的后果。

  b.標(biāo)本/陰性對照比值

  在實驗條件(包括試劑)較難保證恒定的情況下，ELISA試劑盒這種判斷法較為合適。在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的A值后，計算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性(positive)，而是病人(patient)的縮寫，不應(yīng)誤解。為避免混淆，宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為陽性標(biāo)準，現(xiàn)多為各種測定所沿用。實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值。應(yīng)注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。因此，這類試劑盒規(guī)，如N<0.05(或其他數(shù)值)，則按0.05計算。

  (2)競爭法

  在競爭法ELISA試劑盒中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應(yīng)zui為敏感。

  競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果，因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。

  a. 陽性判定值法

  與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先計算陰性對照A值的平均值(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX)，ELISA試劑盒兩個平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個特定的數(shù)值(例如0.300),試驗才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)小于2.000，而且應(yīng)≥0.5×NCX并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個陰性對照重新計算×NCX;如有2個陰性對照A超出以上范圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算：陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX，標(biāo)本A值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性，A>陽性判定值的反應(yīng)為陰性。

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