ELISA實(shí)驗(yàn)—試劑盒構(gòu)成及檢測(cè)原理

  ELISA簡(jiǎn)要操作步驟及原理

  以雙抗體夾心法為例，古朵生物對(duì)ELISA簡(jiǎn)要操作步驟如下：

  包被抗體包被到酶標(biāo)板

  加樣本/標(biāo)準(zhǔn)品

  加生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體

  加HRP標(biāo)記的鏈霉親和素

  加顯色底物TMB

  加終止液

  ELISA 試劑盒組分

  酶標(biāo)板(Microplate)

  酶標(biāo)板，在ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)中作為載體的酶標(biāo)板對(duì)抗原抗體或抗原抗體復(fù)合物的吸附起著重要作用。

  標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)

  標(biāo)準(zhǔn)品即為已知濃度的目標(biāo)物(樣本中待測(cè)因子)的純蛋白，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋，用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體(Detected Antibody)

  檢測(cè)抗體即為與目標(biāo)物特異性結(jié)合的抗原/抗體鑒于酶標(biāo)二抗的局限性，現(xiàn)在廠家一般引入生物素親和素系統(tǒng)(biotin avidin system,BAS)。

  洗滌液(Washing Buffer)

  長(zhǎng)時(shí)間的孵育后，會(huì)出現(xiàn)非特異性結(jié)合，這時(shí)就需要洗滌液來(lái)洗去非特異性結(jié)合的蛋白或抗體。常用的洗滌液有:磷酸鹽緩沖液(PBS)、平衡鹽緩沖液(BBS)等。

  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(HRP-Streptavidin)

  鏈霉親和素是Streptomyces avidinii(阿維丁鏈霉菌)的分泌物。鏈霉親和素分子由4條相同的膚鏈組成，非特異性結(jié)合遠(yuǎn)比親和素低。在ELISA試劑盒中，用于與檢測(cè)抗體上的生物素相結(jié)合。

  顯色底物 (TMB)

  TMB在過(guò)氧化氫存在的情況下可被HRP或其他過(guò)氧化物酶催化生成可溶的藍(lán)色物一價(jià)物。當(dāng)顯色反應(yīng)被酸性溶液終止后，產(chǎn)物由藍(lán)色一價(jià)物轉(zhuǎn)為黃色二價(jià)物，此時(shí)可在450nm 測(cè)定吸光度

  ELISA試劑盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營(yíng)宗旨;牢固樹(shù)立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開(kāi)發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。