Elisa實驗：ELISA檢測試劑盒試驗原理

  ELISA檢測試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。

  ELISA檢測試劑盒可以用于：(1)檢測大分子抗原和特異性抗體等;(2)具有快速、靈敏、簡便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點。

  ELISA檢測試劑盒實驗中的血清需采用血管收集血液，室溫血液自然凝固30分鐘，1000xg離心15分鐘左右，收集上清，分裝后，標(biāo)好號，-20°C或-80°C保存。運輸是用干冰。

  把ELISA檢測試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。對于一個旨在分離CD4陽性T的試劑盒來說，操作流程主要有以下幾步。首先，將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育，使抗體與CD4+T結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(biāo)(即不表達(dá)CD4的)，留下磁珠-抗體-復(fù)合物。將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞，形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物，而所有的CD4+細(xì)胞留在上清中。zui后，只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進(jìn)行下游研究了。

  ELISA檢測試劑盒試驗有必要恪守以下3個中心原理：

  (1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并堅持其免疫學(xué)活性;

  (2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能堅持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;

  (3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可依據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在，并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，ELISA檢測試劑盒可依據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。

  ELISA檢測試劑盒免費代測注意事項

  1.從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

  2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差

  3.建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。

  4.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

  5.為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

  6.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

  7.底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

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