免疫組化大家基本上都做過，你知道有二抗，也應(yīng)該知道免疫組化的原理就是一抗結(jié)合到目標(biāo)蛋白，再有二抗來進(jìn)行信號放大，大概是這樣：

但是你知道二抗的信號放大實(shí)際上有多種方法……這就需要你進(jìn)行二抗標(biāo)記方法的選擇，簡單的二抗標(biāo)記方法是直接法：

就是直接在二抗上標(biāo)記酶，比如HRP，來進(jìn)行顯色，這樣的二抗實(shí)際上很便宜，但是缺點(diǎn)就是靈敏度低，好多低豐度的蛋白，結(jié)合不上，免疫組化染出來的效果就不太好。

第二種方法，叫做PAP，比如二抗標(biāo)記了HRP，他們就在孵育二抗后，再孵育一種能結(jié)合HRP的一抗，就像這樣：

這種方法靈敏度是上去了，但是非特異性增高了，于是被主流淘汰了。

第三種方法被稱為ABC法或者SABC法，主要是在二抗上標(biāo)記生物素，孵育二抗后，加入親和素以及標(biāo)記了HRP的生物素，以這樣的聚合方式，來進(jìn)行信號的放大作用：

這種方法的優(yōu)點(diǎn)是能夠成倍提高靈敏度，但同時(shí)也會提高非特異性，于是就產(chǎn)生了第四種方法，LSAB法標(biāo)記的二抗：

這種方法，直接在親和素上加上HRP標(biāo)記，靈敏度也很高，同時(shí)降低了SABC法的非特異性。而且，LSAB法在實(shí)驗(yàn)的時(shí)一般孵育時(shí)間短（通常就10分鐘）。

但SABC法和LSAB法在實(shí)驗(yàn)過程中會需要進(jìn)行內(nèi)源生物素封閉，會麻煩一些。為了省去麻煩，就產(chǎn)生了第五種標(biāo)記方法，也就是Polymer法，就是在二抗上標(biāo)記聚合的HRP：

這樣二抗的信號就得到了放大，靈敏度也提高了，但Polymer法、SABC法、LSAB法，都不能用于定量實(shí)驗(yàn)，只能用在IHC上。

那免疫熒光呢？免疫熒光主流是采用直接法、LSAB法，以及直接標(biāo)記或者LSAB標(biāo)記的三抗來進(jìn)行信號放大的。總結(jié)一下，就是直接法的二抗便宜但是靈敏度差；PAP法基本已經(jīng)淘汰，LSAB和SABC法的靈敏度高，但是貴，步驟多；Polymer法靈敏度高，步驟簡單，但是貴。

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