人干擾素-a(IFN-a)ELISA試劑盒

  (用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

  原理

  本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 IFN-a 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 IFN-a與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IFN-a，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，IFN-a濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IFN-a濃度。

  試劑盒組成(2-8℃保存)

  酶標(biāo)板(Coated Wells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate)12ml

  10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer)12ml20×濃縮洗滌液(Wash Buffer)50ml

  標(biāo)準(zhǔn)品(Standards)：2ng/瓶2瓶底物工作液(TMB Solution)12ml

  抗體工作液(Biotinylated Antibody)12ml終止液(Stop Solution)12ml

  準(zhǔn)備試劑與收集血樣

  1. 收集標(biāo)本：血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí);長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20 ℃或-70 ℃)保存，避免反復(fù)凍融。

  2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成4000pg/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，每管加入標(biāo)本稀釋液300ul。在管中加入4000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對(duì)照。

  3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。

  4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋(示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)

  檢測(cè)程序

  1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。

  2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

  3. 每孔中加入抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。

  4. 洗板：同前。

  5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。

  6. 洗板：同前。

  7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘。

  8. 每孔加入100ul終止液混勻。

  9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。

  結(jié)果計(jì)算與判斷

  1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。

  2. 以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62、31、0 PG/ml l為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)IFN-a含量。

  試劑盒性能

  1. 靈敏度：小的IFN-a 檢測(cè)濃度小于15pg/ml。

  2. 特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人IFN-a。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。

  3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于11%。

  注意事項(xiàng)

  1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

  2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。

  3. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。

  4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。

  4. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷!

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