對(duì)于小鼠白介素6 ELISA免疫測(cè)定，您真的了解嗎?

  ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。ELISA免疫測(cè)定,您真的掌握透徹了嗎?

  ELISA免疫測(cè)定目的是?

  1.測(cè)定體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等;

  2.測(cè)定激素，包括小分子量的甾體激素等;

  3.測(cè)定抗生素和藥物;

  4.測(cè)定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等;

  5.利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體，例如抗-HBs等;

  ELISA免疫測(cè)定原理：

  ①使抗原(或抗體)結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性;

  ②使抗原(或抗體)與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo) 抗原(或抗體)，而且此酶標(biāo)抗原(或抗體)既保留其免疫活性，又保留其酶活性;

  ③測(cè)定時(shí)將受檢標(biāo)本(抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原(或 抗體)按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng)，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其它物質(zhì)分開(kāi)，zui后結(jié)合 在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢的抗體或抗原量成一定比例;再加入酶反應(yīng)底物后，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物，根據(jù)其顏色反應(yīng)的 深淺進(jìn)行定性或定量分析，以了解被測(cè)標(biāo)本中抗體或抗原含量。

  小鼠白介素6 ELISA免疫測(cè)定步驟：

  1.包被;

  2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔);

  3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。

  4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘;

  5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml;

  6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值。

  注意：引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因有標(biāo)本因素、試劑因素、操作因素。

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