人唾液皮質(zhì)醇ELISA試劑盒操作說明

  本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人唾液皮質(zhì)醇的含量。

  有效期：6個(gè)月

  保存條件：2-8℃

  人唾液皮質(zhì)醇ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人唾液皮質(zhì)醇捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人唾液皮質(zhì)醇呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值)，計(jì)算樣品濃度。

  人唾液皮質(zhì)醇ELISA試劑盒樣本處理及要求

  血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  3. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  注：標(biāo)本溶血會(huì)影響后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

  需要而未提供的試劑和器材

  酶標(biāo)儀(450nm)

  加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

  37℃恒溫箱

  蒸餾水或去離子水

  注意事項(xiàng)

  嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

  洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

  消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

  底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

  避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

  在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

  平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

  任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

  不能使用過期產(chǎn)品。

  如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

  試劑準(zhǔn)備

  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

  20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

  操作步驟

  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

  樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。

  除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

  實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

  以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。

  試劑盒性能

  檢測(cè)范圍：3.75 ng/mL – 120 ng/mL。

  靈敏度：低檢測(cè)濃度小于0.1 ng/mL。

  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

  重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

  ELISA試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。