動物血清的使用指南，你知道嗎?

  血清在細胞培養(yǎng)中為細胞提供氨基酸，蛋白質(zhì)，維生素(特別是脂溶性維生素如A，D，E，K)，碳水化合物，脂肪，激素，生長因子，礦物質(zhì)及微量元素。此外，血清還可以緩沖培養(yǎng)基，抑制蛋白水解酶，增加培養(yǎng)基的粘度，降低在移液或攪拌時造成的剪切力。

  對于動物血清的正確使用，這里做一個簡單的說明。

  1、儲存

  血清的保質(zhì)期是5年，儲存溫度-10 ~ -30℃。

  血清長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，長期保存血清必須在-10℃以下儲存，并避免反復(fù)凍融。

  2、解凍

  將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

  如果在37℃或高的溫度解凍血清，血清中會出現(xiàn)沉淀。此沉淀可能包括磷酸鈣結(jié)晶，但不改變血清的性能，同樣血清熱滅活也會導(dǎo)致沉淀的形成。

  3、渾濁和沉淀

  所有的血清可能保留一些纖維蛋白原。某些外部因素可能引發(fā)纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白，導(dǎo)致血清解凍后可能會觀察到絮狀物或混濁。這些物質(zhì)的存在不會改變血清的性能。

  如果想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以低速離心1~2min，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)使用。

  注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。

  4、熱滅活處理

  通常不使用熱滅活血清，除非某些特定的細胞系特別需要。熱滅活會降低或破壞血清中的生長因子，影響某些細胞的生長。

  熱滅活zui初是為了滅活補體及支原體。目前，如果血清中出現(xiàn)支原體，可以通過過濾去除;而去除補體通常是不必要的，除非是在準備或檢測病毒或細胞毒性試驗時。有研究顯示，血清37℃孵育就可以滅活血清中熱不穩(wěn)定的補體成分，只有很少一部分細胞在這種滅活血清中生長得好，如胚胎干細胞和許多昆蟲細胞。

  1)按正確操作解凍血清，恢復(fù)室溫。

  2)水浴56℃提前預(yù)熱。

  3)將準備好的血清和裝有相同體積水的燒杯同時放入水浴鍋，當(dāng)燒杯中的溫度計指示達到56℃時開始計時，滅活30min后結(jié)束，整個過程中需要隨時搖晃混勻。

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