技術(shù)資料—石蠟包埋組織microRNA快速提取試劑盒

  古朵生物—石蠟包埋組織microRNA快速提取試劑盒(離心柱型)

  一、原理簡介

  改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活 RNA 酶，然后總 RNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟，漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，zui后低鹽的 RNasefree water 將純凈 RNA(microRNA)從硅基質(zhì)膜上洗脫。

  二、試劑盒特點

  1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

  2. 結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好，純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點，不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程，RNA 可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。

  3. *的 MRL 裂解液配方，可以有效的消除基因組污染。

  4. 多次漂洗去蛋白過程，提取 RNA 純度高。

  三、注意事項(實驗前必須首先閱讀這部分!)

  1. 為防止RNA降解，所有離心步驟如未加說明，均在4℃低溫進(jìn)行。使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000 rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)，如Eppendorf5415C 或者類似離心機(jī)。

  2. 裂解液 MRL 中含有刺激性有害化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

  3. 預(yù)防 RNase 污染，在實際的操作中應(yīng)遵循以下指南(參見《分子克隆》)

  * 全程佩戴一次性手套。皮膚經(jīng)常帶有細(xì)菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成為RNA酶的來源。培養(yǎng)良好的微生物實驗操作習(xí)慣預(yù)防微生物污染。

  * 使用滅菌的、一次性的塑料器皿和自動吸管抽提RNA，避免使用公共儀器所導(dǎo)致的RNA酶交叉污染。

  * 使用無 RNA 酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。玻璃器皿可以在 150°C 的烘箱中烘烤 4 小時，塑料器皿可以在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 分鐘，用水*漂洗干凈后高壓滅菌備用。

  4. 考慮到環(huán)保問題，本試劑盒不含有實驗室常用試劑，用戶使用前需要自備。

  5. 常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳和變性膠電泳均可以用來分析大 RNA 的質(zhì)量。好的 RNA 產(chǎn)物在電泳后應(yīng)該可以看到明顯的二條優(yōu)勢核糖體 RNA 帶，分別為~5Kb(28S)，~2Kb(18S)，條帶亮度比值約為 2：1。

  6. 檢測 OD260/OD280吸光度比值時，RNA 樣品應(yīng)該溶于 TE 后檢測，如果用水稀釋后檢測，由于一般水離子強(qiáng)度和 PH 值低，會使 OD280升高，從而使比值降低。

  7. 加入裂解液 MRL 勻漿后，加前，樣品可在 –60℃-70℃ 保存一個月以上。

  microRNA快速提取試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。