古朵淺談酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試驗(yàn)辦法

  酶聯(lián)免疫測(cè)定是將抗原抗體反響的高度特異性和酶的催化作用相結(jié)合，開展建立一種非放射性符號(hào)免疫分析辦法。因?yàn)镋LISA具有靈敏度高、特異性強(qiáng)，酶免疫試劑的性質(zhì)比較穩(wěn)定，操作辦法簡潔快速、無放射性污染以及應(yīng)用范圍廣等很多優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)根底理論研究，病毒學(xué)和生物化學(xué)查驗(yàn)等工作中應(yīng)用十分廣泛。

  該法需將純化的抗原包被在固相載體，與必定稀釋度的待側(cè)血清反響，然后與酶符號(hào)的第二抗體(抗人IgG,IgA,IgM或抗人IgG.A.M的混合物)反響，酶可催化色原反響，在酶標(biāo)測(cè)定儀必定波長下進(jìn)行比色，測(cè)定吸光度。

  ELISA試劑盒的關(guān)鍵是要具備高質(zhì)量純化或重組的抗原，對(duì)生產(chǎn)廠家的抗原要求很高。因?yàn)榧兓幕蛑亟M的抗原越來越多，以及商品化的高質(zhì)量的ELISA試劑盒的面市，它應(yīng)用于臨床免疫試驗(yàn)室的本身抗體的檢測(cè)已日漸增多，該法檢測(cè)本身抗體快速、靈敏及特異性高。

  一、免疫熒光法----本身抗體確診的標(biāo)準(zhǔn)技能(IFA)

  免疫熒光測(cè)定法可分為直接和直接兩類，在本身抗體檢測(cè)中，以直接免疫熒光法zui為常用。因?yàn)楸旧砜乖姆轿粵Q議了其相應(yīng)的抗體的典型熒光形式，該法能經(jīng)過顯微鏡觀測(cè)地判別安排或細(xì)胞內(nèi)熒光的分布。

  將已稀釋血清與試驗(yàn)基質(zhì)進(jìn)行溫育，令特異性抗體與試驗(yàn)基質(zhì)中相應(yīng)抗原結(jié)合，然后再與熒光符號(hào)的第二抗體溫育，zui后在熒光顯微鏡下觀察相應(yīng)部位的特異性熒光形式。

  此辦法靈敏、重復(fù)性好。但需要一臺(tái)質(zhì)量較好的熒光顯微鏡，且對(duì)操作人員要較高，操作雜亂耗時(shí)長，繁瑣。

  二、免疫印跡法(Immunoblot assay)(westerblot)

  此法是將聚丙烯酰胺凝膠電泳別離蛋白及多肽與免疫反響的高特異性相結(jié)合的一項(xiàng)技能。蛋白質(zhì)在電泳中依分子量大小別離，然后將別離好的蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維薄膜上，用酶符號(hào)的抗體或蛋白A進(jìn)行染色。該法簡單、快速。是現(xiàn)在美國、中國等上很多國家衛(wèi)生機(jī)構(gòu)的zui終承認(rèn)辦法。但其制備辦法繁瑣、本錢相對(duì)較高。

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