細(xì)胞因子ELISA試劑盒在處理和保存方面需考慮那些問題

  一、血清標(biāo)本如是以無菌操作別離，則能夠在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下。

  二、標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所形成的的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。

  三、要注意防止呈現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有相似過氧化物的活性，因此，在以HRP為符號酶的ELISA測定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，然后與后面加入的HRP底物反響顯色。

  四、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生破壞效果，然后引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振動(dòng)，重復(fù)倒置混勻即可。

  五、細(xì)胞因子ELISA試劑盒，樣本的采集及血清別離中要注意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的成長，其所分泌的一些酶可能會(huì)對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對用相應(yīng)酶作符號的測定辦法發(fā)生非特異性干擾。

  ELISA檢測試劑盒有哪些免疫測定：

  ELISA檢測試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不行濺起，不行發(fā)作氣泡。

  加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)則的量參加板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)換吸嘴，避免發(fā)作交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法 ELISA)需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液，再在其中參加血清標(biāo)本，然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以保 證混和。加酶結(jié)合物使用液和底物使用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液進(jìn)程迅速完結(jié)。

  在ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反響的完結(jié)需要有一定的溫度和時(shí)刻，這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。

  ELISA屬固相，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī)，只要貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程，因而需經(jīng)分散，才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這便是為什么ELISA反響總是需要一定時(shí)刻的溫育。

  溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在建立ELISA方法作反響動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，試驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，ELISA檢測試劑盒產(chǎn)物的生成可達(dá)高峰。為加速反響，可進(jìn)步反響的溫度。

  有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用高的溫度?？乖贵w反響4℃為*，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中，以構(gòu)成多的沉積。但因所需時(shí)刻太長，在ELISA中一般不予采用。

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