古朵淺談EL ISA檢測血清注意事項

  大部分EL ISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集應(yīng)留意防止溶血紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物貢以HRP為符號的EL ISA測定中溶血標(biāo)本可能會添加啡特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有污染菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。

  一般說來在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4C。超越-周測定的需20°C保存.凍住血清融解后蛋白質(zhì)局部濃縮散布不均應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡?；鞚峄蛴谐练e的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾弄清后再檢測。重復(fù)東融會使抗體效價下跌所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作展次檢測宜少量分裝冰存。保存血清自收集時就應(yīng)留意無菌操作也可參加適當(dāng)防腐劑。

  古朵詳述EL ISA試劑盒檢測血清的詳細(xì)留意事項:

  1.要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)其有類似過氧化物的活性因而在以HRP為符號酶的ELISA測定中如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。

  2.冰凍保存的血清標(biāo)本須置意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果然后引起假陰性結(jié)果。此外凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振蕩重復(fù)倒置混勻即可。

  3.標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)菌體污染所造成的的混油或駕狀物時應(yīng)離心沉積后取上清檢測。

  4.樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止菌體污染則菌體的成長其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;-則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作符號的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。

  5.血清標(biāo)本如是以無菌操作別離則可以在2~8C下保存周如為有菌操作則主張冰凍保存。樣本的長期保存應(yīng)在70°C以下。

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