牛血清使用所產(chǎn)生的問(wèn)題，如何合理熱滅活?

  由于牛血清營(yíng)養(yǎng)豐富，貯存條件特殊，因此在貯存和使用過(guò)程中容易產(chǎn)生以下問(wèn)題：

  1、改變培養(yǎng)液的pH值

  牛血清的pH理論值為7.0～8.0，培養(yǎng)基在加入規(guī)定量的碳酸氫鈉后(即達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的滲透壓)，再加入10%的牛血清，一般會(huì)使培養(yǎng)液的pH值發(fā)生改變。因此在使用過(guò)程中應(yīng)注意pH的變化，如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調(diào)pH到所需值。

  2、由于血清的營(yíng)養(yǎng)成分豐富，非常適合細(xì)菌、真菌和支原體等生長(zhǎng)，所以血清很容易受到污染。

  3、血清在貯存解凍過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生沉淀，這是由于血清中含有大量脂蛋白、纖維蛋白及多肽類(lèi)物質(zhì)，在-15℃冷凍保存解凍后就會(huì)自然形成沉淀，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，沉淀量會(huì)增加。因此在融化血清時(shí)一般應(yīng)先在4℃放置使之解凍，然后放在室溫使血清完全融化，以避免沉淀的增加。添加血清時(shí)應(yīng)避免把沉淀加入培養(yǎng)液，否則由于沉淀的存在會(huì)使得所培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量黑點(diǎn)，或者細(xì)胞表面將會(huì)覆蓋一層油狀物質(zhì)，影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。為減少血清的損失，可以把有沉淀的血清收集起來(lái)進(jìn)行離心處理，將上清液加入培養(yǎng)液使用。

  如何合理熱滅活

  必須要滅活，根據(jù)血清廠家多年來(lái)總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)，常規(guī)解凍后，40℃水浴加熱20分鐘即可，能夠大程度地保留營(yíng)養(yǎng)成分。

  另外，還有三個(gè)細(xì)節(jié)需要注意：

  1、將血清用三步法徹底解凍后再進(jìn)行熱滅活。

  2、為盡可能減輕熱滅活對(duì)血清品質(zhì)的影響，一次滅活的血清體積不宜過(guò)大。

  3、溫度需有對(duì)照

  好準(zhǔn)備同樣的容器裝相等體積的水(初始溫度與血清相同溫度)，滅活時(shí)將裝有血清和水的容器同時(shí)放入40℃水浴，在裝水的容器中放置溫度計(jì)，加熱過(guò)程中不時(shí)地輕輕旋轉(zhuǎn)混勻血清，當(dāng)溫度計(jì)顯示達(dá)到40℃左右，開(kāi)始計(jì)時(shí)。

  胎牛血清注意事項(xiàng)：

  水面沒(méi)過(guò)血清液面且管底不接觸水浴鍋底面。

  溫度計(jì)需時(shí)不時(shí)晃動(dòng)，且不接觸管壁。

  初始溫度應(yīng)相同。

  兩容器材質(zhì)相同。

  液體體積相同。

  裝水容器口用封口膜或保鮮膜封住，只露出溫度計(jì)即可。

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