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如何使用生物素標(biāo)記抗體或蛋白？
發(fā)布時間：2022-05-23瀏覽次數(shù)：1026返回列表
生物素，是一個分子量只有244.31Da的小分子，經(jīng)活化后可與蛋白、抗體等生物大分子結(jié)合，不僅可以很好地保持大分子的生物活性，而且與親和素結(jié)合使用時具有多級放大作用，使其廣泛應(yīng)用于微量抗原、抗體定性、定量檢測及定位觀察研究。
那么如何使用生物素標(biāo)記抗體或蛋白呢？下面古朵給大家分享一下。
1.10ul，50ul，200ul，1000ul可調(diào)移液器
2. 恒溫箱（37℃）
3. 離心機（離心力可達(dá)到12,000×g）
4. 生物素標(biāo)記試劑盒（Cata.No:EBLK0002, Elabscience)
實驗前準(zhǔn)備
1.仔細(xì)閱讀使用說明書。
2.計算待使用NH2-Reactive Biotin的量。
3.提前20min從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫（注：不需要用到的NH2-Reactive Biotin繼續(xù)放置冰箱中）。
4.溶解NH2-Reactive Biotin：加入30ulDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中，靜置10min，待其充分溶解，此時生物素的濃度為10mM。
操作步驟：（本操作步驟按照1mg的量進(jìn)行標(biāo)記）
1.取1mg待標(biāo)記抗體于Filtration tube中，并加入相應(yīng)體積的Labeling Buffer，使抗體的終濃度為2mg/ml，12,000 x g離心10min。（注：①Filtration tube的大體積為0.5ml②待標(biāo)記抗體濃度低時，可先超濾離心一次）
2. 加入13.3ul NH2-Reactive Biotin 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使終體積為0.5ml，并輕輕吹打混勻。放入37℃恒溫箱中避光溫育30min。12,000 x g離心10min。
3. 加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使終體積為0.5ml，并輕輕吹打混勻，12,000 x g離心10min。
4. 操作3重復(fù)一次。
5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中，輕輕吹打。將濾芯倒轉(zhuǎn)放置于另一個離心管中，6,000 x g離心10min。
6. 收集離心管中的溶液，即為生物素標(biāo)記的抗體。
