培養(yǎng)基的制備原理
培養(yǎng)基是人工地將多種物質(zhì)按各種微生物生長的需要配置而成的一種混和營養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)或分離各種微生物。因此，營養(yǎng)基質(zhì)應(yīng)當(dāng)有微生物所能利用的營養(yǎng)成分（包括碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因素）和水。根據(jù)微生物的種類和實驗?zāi)康牟煌?，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。
操作步驟
1、計算稱量 根據(jù)配方，計算出實驗中各種藥品所需要的量，然后分別稱(量)取。
2、溶解 一船情況下，幾種藥品可一起倒入燒杯內(nèi)、先加入少于所需要的總體積水進(jìn)行加熱溶解。加熱溶解時，要不斷攪拌。如有瓊脂在內(nèi)，應(yīng)注意。待完全溶解后，補足水分到需要的總體積。
3、調(diào)節(jié)pH 用滴管逐滴加入1N NaOH或lN HCl邊攪動；邊用pH試紙測其pH值，直到符合要求時為止。
4、過濾 要趁熱用四層紗布或濾紙過濾。
5、分裝 按照實驗要求進(jìn)行分裝。
6、加塞 培養(yǎng)基分裝好以后，在試管口或燒瓶口上應(yīng)加上棉塞。
7、滅菌 在塞上棉塞的容器外面再包一層牛皮紙，便可進(jìn)行滅菌。

細(xì)菌的的分離與接種技術(shù)
生長上應(yīng)用的菌種必須是純種，但是篩選菌種時通過增殖培養(yǎng)后得到的菌種并不是純種，還需進(jìn)行純種分離；就是在生產(chǎn)上長期應(yīng)用的菌種，由于長期使用，也容易發(fā)生退化與變異，也需進(jìn)行純種分離。因此純種分離是微生物學(xué)的主要技術(shù)之一，操作務(wù)必熟練。常用接種方法有：固體培養(yǎng)基接種、半固體培養(yǎng)基接種、液體培養(yǎng)基接種。

材料
1.菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草桿菌
2.接種工具： 接種環(huán)、酒精燈、接種箱

方法
1.固體培養(yǎng)基：
（1）連續(xù)劃線適合于接種材料中含菌不太多的標(biāo)本（如尿液等）或培養(yǎng)物。
（2）分區(qū)劃線適合于糞便等含菌量較多的標(biāo)本或污染菌種的分離純化。
在培養(yǎng)皿底部注明接種菌名、接種者姓名、日期等，將平皿倒置于37℃溫箱中。（為什么？）
（準(zhǔn)備室應(yīng)給準(zhǔn)備好分區(qū)劃線和連續(xù)劃線的示教）

2.半固體培養(yǎng)基：穿刺接種
不可穿至管底（3/4），循原路退出。37℃溫箱中培養(yǎng)。
今年為新?lián)Q菌種（變形桿菌），動力很好。

3.液體培養(yǎng)基：
取標(biāo)本后在接近液面的管壁上輕輕研磨，并粘取少許肉湯調(diào)和，使細(xì)菌混合于肉湯中。37℃溫箱中培養(yǎng)。

觀察細(xì)菌的生長現(xiàn)象
不同種類的細(xì)菌在培養(yǎng)基上生長，往往表現(xiàn)為不同的生長現(xiàn)象，可以通過生長現(xiàn)象的觀察，進(jìn)行細(xì)菌的初步鑒定。

材料
菌種：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、乙型鏈球菌、變形桿菌
培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基

操作
1．固體培養(yǎng)基多用于觀察細(xì)菌的菌落、菌苔、細(xì)菌的分離培養(yǎng)或純培養(yǎng)。

可將菌落分為三個類型：
（1）光滑型菌落（Smooth type colony）：又稱S型菌落，此種菌落特點為表面光滑、濕潤、邊緣整齊、至于其它特點如凸起或扁平、色素、透明度、溶血等可因菌種而異。
（2）粗糙型菌落（Rough type colony）：又稱R型菌落，此種菌落表面粗糙、干燥、邊緣不整齊。
（3）粘液型菌落（Mucoid type colony）：又稱M型菌落，此型菌落表面光滑、濕潤、呈粘液狀，以接種環(huán)觸之可拉出絲狀物，“成絲試驗”陽性可作為鑒別，如肺炎桿菌。
固體平板上，菌量多的部分，菌落常融合成片，形成菌苔，菌苔一般不做為鑒定的指標(biāo)。

2．半固體培養(yǎng)基多用于觀察細(xì)菌的動力。（金黃色葡萄球菌、變形桿菌）
在半固體培養(yǎng)基中，無鞭毛細(xì)菌沿接種線生長，接種線清晰，培養(yǎng)基澄清；有鞭毛細(xì)菌彌散生長，接種線模糊不清，周圍培養(yǎng)基變混濁；借此可以判斷細(xì)菌有無動力。

3．液體培養(yǎng)基接種多用于測定細(xì)菌的生化反應(yīng)（肉湯、葡萄糖蛋白胨水、各種單糖發(fā)酵管等液體培養(yǎng)基）、工業(yè)微生物發(fā)酵、觀察細(xì)菌的不同生長現(xiàn)象。
肉湯在未接種細(xì)菌前是澄清的，接種細(xì)菌后可有以下三種生長現(xiàn)象：
（1）混濁生長：液體變混濁。 （大腸桿菌）
（2）沉淀生長：上層培養(yǎng)液澄清，管底有絮狀或顆粒狀沉淀物。（鏈球菌）
（3）形成菌膜：培養(yǎng)液澄清，表面形成一層菌膜。 （枯草桿菌）哪些細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中可形成菌膜？

細(xì)菌的分布
細(xì)菌種類多、繁殖快、適應(yīng)環(huán)境能力強，因此，細(xì)菌廣泛分布于自然界，在水、土壤、空氣、食物、人和動物的體表以及與外界相通的腔道中，常有各種細(xì)菌和其它微生物存在。在自然界物質(zhì)循環(huán)上起重要作用，多數(shù)對人類有益，對人致病的只是少數(shù)。

材料
1、普通固體培養(yǎng)基 血瓊脂平板
2、碘酒、肥皂、自來水等

方法
1、空氣中的細(xì)菌大多為非致病菌，是實驗操作污染的重要來源。檢查時用普通瓊脂平板，打開平板蓋，放置10min。37℃溫箱中培養(yǎng)。
2、手指上有細(xì)菌存在，檢查消毒前后細(xì)菌分布情況說明為什么要飯前便后要洗手，病從口入的道理。選擇男女各一名同學(xué)。
3、飛沫中有細(xì)菌，說明為什么不要對著人咳嗽、打噴嚏，不僅不禮貌，從微生物學(xué)角度來說，可以傳播一些疾病。（檢查飛沫中的細(xì)菌為什么要用血瓊脂平板）。
微生物不僅在自然界分布廣泛，在人體的體表以及與外界相通的腔道，存在著不同種類和數(shù)量的微生物。成年人體有1013個細(xì)胞，而細(xì)菌卻可達(dá)1014，其重量達(dá)1271g，近3斤，其中腸道中有1000g，糞便干重的1/3是細(xì)菌，皮膚上有200g，口腔、鼻腔、外耳道、泌尿生殖道、眼部有71g。
微生物種類繁多、分布廣泛，建立起“微生物無處不有的概念”， 嚴(yán)格無菌操作，樹立牢固的無菌觀念。

注意事項
是否R型菌落的細(xì)菌致病性都弱？比較日照與濟(jì)寧空氣質(zhì)量。下次實驗看細(xì)菌分布實驗的結(jié)果。注意無菌操作，培養(yǎng)樹立牢固的無菌概念是微生物學(xué)實驗的一項重要任務(wù)