提取植物DNA時遇到多糖成分的干擾， DNA質(zhì)量一直不高，如何消除多糖的影響？

參考見解：一般來說，SDS法提取的DNA會還有較多的多糖，使DNA成膠凍狀。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比較高，可用以下方法試一試：

1、 在 DNA 未溶出之前，先用一些緩沖液洗去多糖。如可用緩沖液：100 mmol/LTris -HCl(pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol洗幾次。

2、 使 DNA 提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入 0.35 倍體積的無水乙醇，迅速混勻，多糖會先沉淀。

3、 沉淀 DNA 時，使多糖保留在溶液中。如用乙醇沉淀時，在待沉淀溶液中加入 1/2 體積的 5 mol/L NaCl，或加 NH4Ac 使終濃度為 10 mmol/L?；?0.5 mL DNA 液中加 0.12 5 mL 4 mol/L NaCl 和 0.625 mL 13% PEG 8000（冰浴 1 h）。

4、 多糖和 DNA 的共沉淀物進(jìn)行再分離。如用 TE緩沖液反復(fù)清洗共沉淀 物，將清洗液合并再用醇沉淀 DNA，或?qū)⒊恋砦锶芙夂?，?jīng)瓊脂糖電泳，切下 DNA 部分再將膠回收，或者用多糖水解酶將多糖降解。還 有在提取緩沖液中加一定量的氯苯(1/2體積)，氯苯可以與多糖的羥基作用而去除多糖 。

上述方法還可組合使用，以達(dá)到佳效果。然而這些方法均會在一定程度上減低 DNA 的提取量；如果材料較少或要求較高，則可考慮用柱層析方法，使用對 DNA 具有 特異性吸附的樹脂來純化 DNA。曾有文獻(xiàn)提到選用 Wizard Purification Kit，PRC-5 柱 ，Sephacryl S-1000 或 S-500，Qiagen Genomic tip 500/G ，或者 CsCl 梯度離心純化 DNA。

血樣4度保存了2月，現(xiàn)在按照酚常規(guī)提取方法不能提取出DNA，有什么解決辦法？

參考見解：按照常規(guī)的酚/lv仿法不可能提不出來，下面是參考方法：

1、 先洗出白細(xì)胞，好有1毫升以上血液。

2、 加入5ml DNA提取緩沖液，(10m mol/L Tris-cl, 0.1 mol/L EDTA, o.5% SDS),混勻。

3、 加入25ul 蛋白酶K ,使終濃度達(dá)到100ug/ml, 混勻，50℃水浴過夜。

4、 用等體積的（酚，lv仿，yi戊醇，25：24：1）混合物抽提一次，5000r/min，10min離心收集水相。

5、 取水層，加入3倍體積-20℃預(yù)冷無水乙醇5000r/min，10min，75%乙醇5000r/min洗DNA，充分干燥將DNA溶于適量水中。

CTAB法提取水稻基因組DNA， TE 溶解后瓊脂糖膠電泳檢測，點樣孔附近有一條明顯的主帶。用MBI 公司產(chǎn)的限制性內(nèi)切酶酶切過夜，鑒定時發(fā)現(xiàn)DNA已經(jīng)被完全切爛，只在溴酚藍(lán)前存在微弱smear狀產(chǎn)物。換用酶，換EP管，滅菌水之后重復(fù)幾次，結(jié)果還是如此。拿其他人的DNA 做對照，酶切結(jié)果正常。用異丙醇將DNA 重新沉淀，換了TE溶解，檢測主帶仍舊清晰，可是用酶切之后DNA還是被切爛。為什么？

參考見解：

1、 公司的酶不行。

2、 如做酶切，DNA好不用異丙醇（因其不易揮發(fā)）而用無水乙醇沉淀。

3、 酶量大或作用時間太長了。

建議重提DNA，取少許用超純水溶解（非TE），按照說明書進(jìn)行酶切。要用新鮮樣品或液氮冷凍-70度保存的樣品。這樣通過降低內(nèi)切酶的活性減少DNA的降解；

要得到全血基因組DNA，可以先用分層液密度梯度離心將淋巴細(xì)胞分離嗎？這樣做，與沉淀全血細(xì)胞然后破壞紅細(xì)胞得到的結(jié)果有何差異？

參考見解：

1、 覺得還是先分離細(xì)胞好，因為DNA和RNA大都是在細(xì)胞核內(nèi)，有紅細(xì)胞反而不太好。從血里面提RNA，用淋巴細(xì)胞分離液先分離有核細(xì)胞的，效果還是不錯的。

2、 現(xiàn)在提取全血的DNA,也就是提取淋巴細(xì)胞中的DNA，用密度梯度離心，只是富積淋巴細(xì)胞，能得到多的DNA而已。一般如果DNA的量的要求不太多的話，沒必要。

3、 如果對基因組的要求不高，可以試試這個方法。取EDTA-Na2抗凝血100μl加至1.5ml Eppendorf管中，加無菌重蒸水500μl；10 000r/分鐘離心3分鐘，棄凈上清；加20μl 5mol/L KI，旋渦振蕩30秒;0.9%NaCl 100μl,150μllv仿/yi戊醇(24∶1)，振蕩30秒；10 000r/分鐘離心5分鐘，吸上清100μl于另一Eppendorf管中，加異丙醇60μl，輕輕混勻，10 000r/分鐘離心5分鐘，棄上清；加冷無水乙醇1000μl，10 000r/分鐘離心5分鐘；棄去無水乙醇，37℃烤干；50μl無菌重蒸水或TE，混勻溶解備用。

從經(jīng)福爾馬林處理后的組織標(biāo)本中提取DNA可以嗎？

參考見解：可以的。

100ml的大量提取，蛋白酶Ｋ是必需的嗎？它的作用是什么？用溶菌酶代替可以嗎？每次在用酚lv仿yi戊醇抽提后，上層里面都是絮狀的蛋白質(zhì)，離心幾次都沉淀不下來，請問是哪里出了問題？

參考見解：一般來說，蛋白酶的作用是將蛋白質(zhì)消化成小的片段，促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的分開，同時，也便于后面的純化操作以及獲得純的核酸。而溶菌酶的作用是破壞微生物細(xì)胞壁，二者作用各異，不可替代。對于實驗中的蛋白問題，建議離心后先用竹簽挑出蛋白，小心吸取上層清液，再重復(fù)抽提幾次試試。

一般植物DNA提取的時候都不加蛋白酶K，這樣提出來的DNA鏈上的組蛋白等未被蛋白酶消化，不是很難除去嗎？那DNA是不是不純？可以用來酶切嗎？

參考見解：蛋白酶k的主要作用并不是消化組蛋白，而是消化細(xì)胞，在動物細(xì)胞DNA的提取也不加蛋白酶k也是可以的，植物細(xì)胞的較易破碎，不需要蛋白酶k的作用。protenase K作用：

1、 消化組蛋白，釋放出DNA。

2、 消化DNAse，提高DNA分子量。

建議還是加蛋白酶k為好，這樣提出來的 DNA分子量會高一點，且純。

提孢子的總DNA，孢子比較小，直接在研磨中加液氮研磨可以嗎？

參考見解：液氮研磨的方法應(yīng)該可行的，做動物組織，植物組織多采用這種方法，植物纖維一樣可以用液氮研磨，要有耐心，邊加液氮邊研磨，研磨好后再抽提，應(yīng)該是可以的。

在CTAB法提取DNA時，有一些品種沒有DNA析出，是什么原因？

參考見解：

1、 用預(yù)冷的異丙醇來沉淀試試，同時研磨的時候要研的非常非常的細(xì)。

2、 沒有看到析出物并不代表沒有沉淀，可以繼續(xù)下一步試驗，溶解的時候少加一點兒。

3、 高離子強(qiáng)度下DNA與CTAB能形成共沉淀?？赡蹹NA就這樣留在沉淀里了。

提取內(nèi)源核酸酶含量豐富的材料的DNA時，怎樣好的抑制內(nèi)源核酸酶的活性？

參考見解：在提取內(nèi)源核酸酶含量豐富的材料的DNA時,可增加裂解液中螯合劑的含量,細(xì)胞裂解后的后續(xù)操作應(yīng)盡量輕柔。

用試劑盒對農(nóng)田土壤的的微生物群落DNA進(jìn)行提取，雖然總DNA提出來了，可是用細(xì)菌的通用引物進(jìn)行PCR的時候卻怎么也擴(kuò)不出來，請有沒有什么好的辦法可以解決這個問題？

參考見解：環(huán)境特別是土壤的樣品成分復(fù)雜，尤其是有腐殖酸具有和DNA類似的性質(zhì)，因此用一般的國內(nèi)試劑盒無法提純。應(yīng)當(dāng)選用自制的提取方法，在裂解液中加入要加入PVP。

洗滌后硅膠膜上仍有雜色殘留？

參考見解：細(xì)胞裂解不充分，裂解液和樣品要快速充分混勻。

洗滌產(chǎn)物中DNA量很少或沒有？

參考見解：

1、 樣品中細(xì)胞或者病毒濃度低。

2、 裂解液和樣品混合不均勻造成細(xì)胞的裂解不充分。

3、 蛋白酶K活性下降造成細(xì)胞裂解的不充分。

4、 溫浴時間不夠造成的細(xì)胞裂解不充分或蛋白降解不完全，盡量把組織切成小塊，延長溫浴時間，使裂解物中沒有顆粒狀物殘留。

5、 在上柱前，裂解物中沒有加乙醇，或用低濃度乙醇代替無水乙醇。

6、 DNA沒有有效洗脫，提高洗脫效率，可將離心柱在加入洗脫液后在室溫靜止至少1min，再離心。

7、 洗脫液pH不合適，低pH值會減少DNA產(chǎn)率，確保洗脫液pH在7.0－8.5之間。8洗脫體積太大，超過200ul洗脫體積所得的DNA濃度會降低，但DNA總量不會減少。