GFP是綠色螢光蛋白（Green Fluorescent Protein）的簡(jiǎn)稱，由238個(gè)氨基酸殘基組成。GFP蛋白質(zhì)*早是由下村脩等人在1962年在一種學(xué)名Aequorea victoria的水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在藍(lán)色波長(zhǎng)范圍的光線激發(fā)下，會(huì)發(fā)出綠色螢光。GFP或其突變體EGFP標(biāo)簽系統(tǒng)等被廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測(cè)，以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)和分布。我們都知道GFP抗體能應(yīng)用于GFP的表達(dá)檢測(cè)、純化以及定位分析。那么該如何檢測(cè)GFP其他的一些突變體，如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表達(dá)和定位呢？

我們來(lái)看一下GFP標(biāo)簽與其它突變體標(biāo)簽的關(guān)系。YFP（Yellow Fluorescent Protein）是黃色熒光蛋白，其序列與GFP基本相同。YFP就是把Thr203以Tyr取代，這樣的GFP不發(fā)出綠色熒光，而發(fā)出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的黃色熒光，也就是YFP。因此兩者的區(qū)別則是發(fā)射波長(zhǎng)了，在其他序列上沒(méi)有區(qū)別。而EGFP是增強(qiáng)型的GFP，發(fā)生了雙氨基酸取代，Leu（亮氨酸）取代GFP上的Phe64（苯丙氨酸），Thr（蘇氨酸）取代了GFP上的Ser65（絲氨酸），與GFP相比，具有更強(qiáng)更穩(wěn)定的綠色熒光。CFP（Cyan Fluorescent Protein）與此類似，也是GFP第66位上的酪氨酸Tyr被色氨酸（Thr）所取代的結(jié)果，發(fā)藍(lán)色熒光。由此可見(jiàn)，GFP標(biāo)簽與其它突變體GFP、YFP、EYFP、CFP的序列非常的類似，只有1-2個(gè)氨基酸殘基的變化。


EarthOx GFP標(biāo)簽抗體用于IF實(shí)驗(yàn) EarthOx GFP標(biāo)簽抗體用于WB實(shí)驗(yàn)，1道為陰性對(duì)照，2道為1:1000倍稀釋

我們先看一下EarthOx的單克隆GFP抗體——Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody [GF28R]，其免疫原是KLH偶聯(lián)的水母GFP蛋白的N末端多肽，由于EGFP、YFP、EYFP、CFP得N末端序列與GFP幾乎完全一致，因此從免疫原上來(lái)說(shuō)，GFP與EGFP、YFP、EYFP、CFP沒(méi)有區(qū)別。更重要的是，EarthOx對(duì)于該單克隆抗體還進(jìn)行了明確的驗(yàn)證試驗(yàn)，試驗(yàn)也表明該Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody均能與GFP、YFP、EYFP、CFP等突變體有交叉反應(yīng)，可以用于GFP、YFP、EYFP、CFP等熒光蛋白的表達(dá)定量、定位分析和檢測(cè)。EarthOx該GFP標(biāo)簽抗體的另一個(gè)是，可用于的試驗(yàn)類型很多，除了基本的WB、ELISA試驗(yàn)外，還可以用于免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光（ICC/IF）、免疫共沉淀（IP）等。該抗體的效價(jià)很高，EarthOx的推薦WB起始稀釋比率為1:1000，實(shí)際應(yīng)用于中還能有更優(yōu)異的表現(xiàn)。因此，EarthOx的Anti-GFP Tag Monoclonal Antibody [GF28R]不僅可以用于GFP，還能應(yīng)用于GFP其他的一些突變體，如EGFP、YFP、EYFP、CFP的表達(dá)和定位等實(shí)驗(yàn)。