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牛血清蛋白的測定方法以及用途有哪些嗎?
發(fā)布時間:2018-08-30瀏覽次數(shù):1488返回列表
牛血清白蛋白分子式數(shù)據(jù)為70 000,這一數(shù)據(jù)是在做PCR的時候使用的數(shù)據(jù)。
牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等電點4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成,其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結合。牛血清蛋白溶液可以作為測量蛋白質(zhì)含量的標準曲線用。
一般買回來的牛血清蛋白是細小片狀的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以鐵為基本原料。
性狀:淡黃色干燥粉末
性狀:淡黃色干燥粉末
性狀:淡黃色干燥粉末
性狀:淡黃色干燥粉末白蛋白
一般用分光光度法測物質(zhì)的含量,先要制作標準曲線,然后根據(jù)標準曲線查出所測物質(zhì)的含量。因此,制作標準曲線是生物檢測分析的一項基本技術 。
5. 考馬斯亮藍法
考馬斯亮藍G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。zui終試劑中含0.01%(W/V)考馬斯亮藍G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。
純的牛血清血蛋白,預先經(jīng)微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,根據(jù)其純度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。
2. 移液管使用。
搖勻,1h內(nèi)以1號管為空白對照,在595nm處比色
3、以A595nm為縱坐標,標準蛋白含量為橫坐標(六個點為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐標軸上繪制標準曲線。
(4)、繪圖時近兩使點在一條直線上,在直線上的點應該在直線兩側。
樣品即所測蛋白質(zhì)含量樣品(含量應處理在所測范圍內(nèi)),依照操作步驟1操作,測出樣品的A595nm,然后利用標準曲線或回歸方程求出樣品蛋白質(zhì)含量。
一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間,所以上述樣品如果A595nm值太大,可以稀釋后再測A595nm值,然后再計算。