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比色法和分光光度法的基本知識
發(fā)布時間：2017-12-12瀏覽次數(shù)：1528返回列表
一、 光的特性
光是由光量子組成的，具有二重性，即不連續(xù)的微粒和連續(xù)的波動性。波長和頻率是光的波動性和特征，可用下式表示：
λ＝C/V
式中λ為波長，具有相同的振動相位的相鄰兩點間的距離叫波長。Ｖ為頻率，即每秒鐘振動次數(shù)。Ｃ為光速等于299770千米／秒。光屬于電磁波。自然界中存在各種不同波長的電磁波，列成表1-1所示的波譜圖。 分光光度法所使用的光譜范圍在200nm-10μ（1μ= 1, 000nm ）之間。其中200nm－400nm為紫外光區(qū)，400nm－760nm為可見光區(qū)，760nm－10,000nm為紅外光區(qū)。
二、光的互補色
假如兩種色光 ( 單色光或復(fù)色光 ) 以適當(dāng)?shù)乇壤旌隙墚a(chǎn)生白色感覺時，則這兩種顏色就稱為“互為補色”。 非發(fā)光物體的顏色 ( 如顏料 ) ，主要取決于它對外來光線的吸收和反射，所以該物的顏色與照射光有關(guān)。一般把物體在白晝光照射下所呈現(xiàn)的顏色稱為該物體的顏色。如果將白晝光照射在黃藍(lán)兩種顏色混合后的表面時．因黃顏料能反射白光中的紅、橙、黃和綠四種色光，而藍(lán)色光能吸收其中的紅、橙和黃三種色光，結(jié)果使混合顏料顯示綠色。這種顏色的混合與色光的加色混合不同，
三、光的選擇性吸收
物質(zhì)對光的吸收是物質(zhì)和光能相互作用的一種形式。由于光的波粒二象性只有當(dāng)入射光的能量同吸光物質(zhì)的基態(tài)和激發(fā)態(tài)能量差相等時才會被吸收，而物質(zhì)的基態(tài)和激發(fā)態(tài)是由物質(zhì)的原子結(jié)成和原子間相互作用決定的，不同的物質(zhì)的能態(tài)不同，對光的選擇性吸收也就不一樣。所以物質(zhì)對光具有選擇吸收性。
要研究光的選擇性吸收，先必須搞清楚其產(chǎn)生的機理。
原子是由質(zhì)子和核外電子組成的，核外電子以不同速度在質(zhì)子周圍不同軌道上旋轉(zhuǎn)，每個軌道的能級是不一樣的。如同衛(wèi)星圍繞地球轉(zhuǎn)的情況是相似的。同時，每個軌道又有方向不同的亞軌道，而同一軌道的不同亞軌上的能量也是不相同的。當(dāng)電子的運動軌道改變都會伴有吸收和釋放能量。所以不同的能量變化有不同的吸收光譜。分子的情況較為復(fù)雜，除了電子的躍遷外還有分子的轉(zhuǎn)動和振動躍遷、分子中原子的轉(zhuǎn)動和振動躍遷。詳細(xì)情況如1圖所示：
當(dāng)某一光線和某一能級差相同時就會發(fā)生特異性吸收。因此不同的物質(zhì)有不同的吸收光譜。
分光光度法對物質(zhì)的定量分析，就是建立物質(zhì)對光的選擇性吸收與物質(zhì)本身物性有關(guān)基礎(chǔ)上，從而能在適當(dāng)?shù)那闆r下，可以不進(jìn)行分離就在混合物中進(jìn)行單組分或多組分的測定。
在實際定量分析中，待分析物一般都是混合物，其中以溶液為主。因此，溶劑效應(yīng)對物質(zhì)吸收帶影響是個很重要的問題，特別是紫外區(qū)的吸光譜。溶液中的吸收光譜和物質(zhì)氣態(tài)光譜是不同的，在非性溶劑中所得的光譜接近于氣態(tài)光譜。而性溶劑對溶質(zhì)吸收光譜的影響大。下圖可以明顯顯示出溶劑效應(yīng)，庚烷性小，其吸收光譜改變少，而乙醇性大，吸收光譜產(chǎn)生了重要改變。這點對臨床檢驗工作有重要影響。例如：NADH是檢驗工作中常用的底物，要計算K值時要用水溶液的吸光系數(shù)，而不要用其他體系的吸光系數(shù)。
要研究光的選擇性吸收，先必須搞清楚其產(chǎn)生的機理。
原子是由質(zhì)子和核外電子組成的，核外電子以不同速度在質(zhì)子周圍不同軌道上旋轉(zhuǎn)，每個軌道的能級是不一樣的。如同衛(wèi)星圍繞地球轉(zhuǎn)的情況是相似的。同時，每個軌道又有方向不同的亞軌道，而同一軌道的不同亞軌上的能量也是不相同的。當(dāng)電子的運動軌道改變都會伴有吸收和釋放能量。所以不同的能量變化有不同的吸收光譜。分子的情況較為復(fù)雜，除了電子的躍遷外還有分子的轉(zhuǎn)動和振動躍遷、分子中原子的轉(zhuǎn)動和振動躍遷。詳細(xì)情況如1圖所示：
當(dāng)某一光線和某一能級差相同時就會發(fā)生特異性吸收。因此不同的物質(zhì)有不同的吸收光譜。
分光光度法對物質(zhì)的定量分析，就是建立物質(zhì)對光的選擇性吸收與物質(zhì)本身物性有關(guān)基礎(chǔ)上，從而能在適當(dāng)?shù)那闆r下，可以不進(jìn)行分離就在混合物中進(jìn)行單組分或多組分的測定。
在實際定量分析中，待分析物一般都是混合物，其中以溶液為主。因此，溶劑效應(yīng)對物質(zhì)吸收帶影響是個很重要的問題，特別是紫外區(qū)的吸光譜。溶液中的吸收光譜和物質(zhì)氣態(tài)光譜是不同的，在非性溶劑中所得的光譜接近于氣態(tài)光譜。而性溶劑對溶質(zhì)吸收光譜的影響大。下圖可以明顯顯示出溶劑效應(yīng)，庚烷性小，其吸收光譜改變少，而乙醇性大，吸收光譜產(chǎn)生了重要改變。這點對臨床檢驗工作有重要影響。例如：NADH是檢驗工作中常用的底物，要計算K值時要用水溶液的吸光系數(shù)，而不要用其他體系的吸光系數(shù)。
小結(jié)：
一、 光的特性
二、光的互補色
三、光的選擇性吸收
