本產(chǎn)品可以對同一張膜進(jìn)行多次Western Blot檢測。在室溫條件下，將用過的膜浸泡在抗體去除液中30-60分鐘，可在不影響抗原蛋白的情況下清除膜上結(jié)合的抗體。隨后，可以使用不同的抗體進(jìn)行下一輪Western Blot實驗，因而可利用同一張膜進(jìn)行多次蛋白檢測。適宜從少量樣品多次檢測多種不同蛋白質(zhì)。采用這方法多次檢測同一張膜上...

用途：

清除硝酸纖維素膜或PVDF 膜上結(jié)合的抗體，不影響抗原蛋白。

使用方法：

1、將膜充分浸泡于適當(dāng)體積的抗體去除液中，室溫孵育15-30分鐘并不時晃動。孵育時間的長短應(yīng)根據(jù)實驗條件進(jìn)行優(yōu)化。洗脫某些抗體需要較長的時間如30-60分鐘。

2、用鑷子取出膜，用自備Western洗滌緩沖液快速淋洗膜一次，然后用TBST洗膜3次，每次10分鐘。

3、此時膜上抗體已去除膜已經(jīng)再生。用脫脂奶粉或BSA封閉一小時，進(jìn)行下一輪Western Blot實驗。

注意事項：

1、有許多因素影響抗體從膜洗脫，如膜類型、抗體類型和濃度及其與抗原結(jié)合特性。因此需要優(yōu)化抗體去除液中孵育膜的時間。

2、確定膜上抗體是否去除與優(yōu)化抗體去除液孵育膜的時間：用ECL工作液孵育再生后的膜約1分鐘，然后進(jìn)行X光膠片曝光并顯影，可確定膜上的抗體是否完全去除。如膠片上顯示條帶，表明抗體未完全去除，應(yīng)繼續(xù)將膜浸泡在抗體去除液中另外孵育30-60分鐘。然后再次ECL檢查膜上抗體是否去除。重復(fù)此步驟直到抗體完全去除并確定最佳孵育時間。

3、使用脫脂奶粉封閉的膜要比使用BSA封閉的膜上的抗體更容易被去除下來。因此準(zhǔn)備進(jìn)行再生的膜，應(yīng)該使用脫脂奶粉而不是BSA封閉。

4、盡量避免使用干燥保存的膜，干的膜上的抗體很難被去除干凈。

5、PVDF膜上使用的效果好于硝酸纖維素膜。

6、使用非化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的Western檢測，例如DAB，NBT/BCIP，不適用于本試劑。

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