單索引接頭（Illumina)由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，單索引接頭（Illumina)是我司眾多優(yōu)質(zhì)基因結(jié)構(gòu)和功能之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括單索引接頭（Illumina)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：單索引接頭（Illumina)
英文名稱：Single-Indexed Adapter
產(chǎn)品貨號：WH0206
產(chǎn)品規(guī)格：12×40μl|12×40μl|24×40μl

本制品是專門針對于illimina高通量測序平臺所開發(fā)的DNA接頭?？捎糜趇llimina高通量測序平臺下DNA和RNA文庫的構(gòu)建。試劑盒分為12種接頭和24種接頭兩種形式，每種接頭均含有的6堿基index序列（barcode），以便于在多樣品混合測序時進(jìn)行不同樣品的區(qū)分。

本制品提供的接頭濃度為30μM，操作時的用法隨著建庫所用試劑盒、初始DNA處理量和DNA片段大小的不同而不同，具體信息請參考使用方法。另外，24種接頭的Index序列詳見接頭序列信息部分。

產(chǎn)品特點：
·選擇方便：分為setA和SetB兩組提供24種單Index標(biāo)記，可根據(jù)需求自由選擇。
·使用方便：試劑盒中配備接頭稀釋液，穩(wěn)定性強(qiáng)，直接用于接頭溶液稀釋。
·質(zhì)量控制：批次間經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)量控制和功能驗證，保證index序列準(zhǔn)確性。

適用范圍：
1．本產(chǎn)品在二代測序（NGS）應(yīng)用中，用于illimina高通量測序平臺下DNA和RNA文庫的構(gòu)建；
2．本產(chǎn)品的具體應(yīng)用包括：外顯子測序，靶向測序，RNA-Seq，ChIP-Seq，以及定向測序和全基因組測序；
3．需要注意的是，本產(chǎn)品不適用于Illumina HiSeq XTM儀器及與甲基化相關(guān)的測序。

產(chǎn)品組成：

組分	WH0206-A	WH0206-B	WH0206-AB
Single-Indexed Adapter（30μM)	12×40μl	12×40μl		24×40μl
Adapter Dilution Buffer	5×1.8ml	5×1.8ml	10×1.8ml

保存條件：-25℃~-15℃下保存，保質(zhì)期一年。

Adapter Dilution Buffer成分：10mM Tris-HCl，10mM NaCl，1mM EDTA，pH8.0~8.5@25℃。

注意事項：（請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項）
1．使用過程中，建議將BaiSeq Single-Indexed Adapter置于冰上或冰盒中，而不要置于25℃以上的環(huán)境中，以免破壞接頭的結(jié)構(gòu)；
2．如需對接頭進(jìn)行稀釋，請使用試劑盒自帶的Adapter Dilution Buffer，而不要使用超純水或者其他Buffer；
3．稀釋后的接頭zuì好在一天內(nèi)用完，不建議將稀釋后的接頭長期保存或反復(fù)凍融；
4．實驗耗材應(yīng)保證無核酸酶和核酸污染，并盡量選擇低核酸吸附性的耗材進(jìn)行實驗。另外，在實驗過程中要注意避免接頭之間的交叉污染。

兼容我司文庫構(gòu)建產(chǎn)品：
1.DNA Library DirectFast Construction Kit（illumina)，目錄號：WH0203；
2.DNA Library Fast Construction Kit（illumina)，目錄號：WH0204；
3.DNA Library Construction Kit（illumina)，目錄號：WH0200。

操作步驟：
1.如果穩(wěn)定Single-Indexed Adapter在連接體系中的加入量為5 μl的前提下，那么根據(jù)初始DNA處理量和DNA片段大小的不同，接頭的工作液濃度如下表所示：

DNA處理量	不同片段大小下的工作液濃度			Adaper:Insert （摩爾比）
	200bp	300bp	400bp
1μg	15μM	10μM	7.5μM	10:1
500ng	19μM	12.5μM	9.5μM	25:1
250ng	15μM	10μM	7.5μM	40:1
100ng	15μM	10μM	7.5μM	100:1
50ng	15μM	10μM	7.5μM	200:1
25ng	7.5μM	5μM	3.75μM	200:1
10ng	3μM	2μM	1.5μM	200:1
5ng	1.5μM	1μM	750nM	200:1
2.5ng	750nM	500nM	375nM	200:1
1ng	300nM	200nM	150nM	200:1
0.25ng	75nM	50nM	37.5nM	200:1

2.使用我公司相關(guān)文庫構(gòu)建產(chǎn)品時（WH0203，WH0204和WH0200），根據(jù)相關(guān)產(chǎn)品的DNA處理量范圍，按上表進(jìn)行接頭母液的稀釋。
3.當(dāng)使用其他公司文庫構(gòu)建產(chǎn)品時，若DNA處理量大于1μg，則按接頭與插入片段摩爾比10:1的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行接頭稀釋；若DNA處理量小于0.25ng，則按接頭與插入片段摩爾比200:1的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行接頭稀釋；而處理DNA的摩爾數(shù)按以下公式進(jìn)行計算：

4.當(dāng)處理DNA片段大小在表中也沒有體現(xiàn)的情況下，處理DNA的摩爾數(shù)也按上述公式進(jìn)行計算。

接頭序列信息
本產(chǎn)品接頭序列包括如下信息：
1．Universal Sequence
  5"-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3′
2．Index Including Sequence
  5"-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC[index1-27]ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3"
3．Index編號和序列

WH0206-A		WH0206-B
Index	Sequence	Index	Sequence
1	ATCACG	13	AGTCAA
2	CGATGT	14	AGTTCC
3	TTAGGC	15	ATGTCA
4	TGACCA	16	CCGTCC
5	ACAGTG	18	GTCCGC
6	GCCAAT	19	GTGAAA
7	CAGATC	20	GTGGCC
8	ACTTGA	21	GTTTCG
9	GATCAG	22	CGTACG
10	TAGCTT	23	GAGTGG
11	GGCTAC	25	ACTGAT
12	CTTGTA	27	ATTCCT

根據(jù)您的關(guān)注的單索引接頭（Illumina)，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：


ZN0030 ADMR mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0056 Androgen Receptor/AR mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0060 Angiopoietin-2/AGPT2 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0100 ATF-2 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0186 CAS mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0203 Catenin γ mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0227 CCR2 mRNA原位雜交試劑盒 100T
ZN0233 CD14 Basignin mRNA原位雜交試劑盒 100T

關(guān)注單索引接頭（Illumina)，的同時，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：



名稱：Actinin/Skeltal Muscle mRNA原位雜交試劑盒
貨號：ZN0019
規(guī)格：100T
基本信息：
保存條件：4℃保存一年
工作量：100張切片。
有效期：一年。
適用種屬：human,rat,mouse
標(biāo)記方式：3’—尾段標(biāo)記
試劑盒中內(nèi)容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.預(yù)雜交液 2ml；
3.Actinin/Skeltal Muscle mRNA原位雜交試劑盒寡核苷酸探針雜交液 2ml；
4.封閉液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高xīn 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化過氧化物酶 5ml。
用戶自備試劑：
原位雜交專用蓋玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
緩沖液(3%檸檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位雜交用 PBS)
一．培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片
準(zhǔn)備工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%檸檬酸——100ml蒸餾水中加檸檬酸(C6H8O7?H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸餾水中加氯化鈉17.6g，檸檬酸三鈉(C6H5O7Na3?2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸餾水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸餾水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸餾水即可。
原位雜交用PBS(1000ml蒸餾水加氯化鈉30g,Na2HPO4?12H2O 6g,NaH2PO4?2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：zuì重要的是及時固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。
1．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．細(xì)胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng)，條件為37℃和5%的CO2，所用培養(yǎng)基為Dulbecco基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細(xì)胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3．培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片均可用下述方法固定：固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌，干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+純甲醇50份混合，室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7．預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體，不洗。
8．雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護(hù)膜揭開后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。
9．雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高xīn：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加生物素化過氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標(biāo)本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時蘇木素復(fù)染，充分水洗。
16.酒精脫水，二甲苯透明，封片。
二．石蠟切片
如果有條件的話，應(yīng)盡可能地采用新鮮標(biāo)本。標(biāo)本離體后，及時予以固定。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。標(biāo)本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊，固定1小時即可，較大的標(biāo)本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感，如動物大腦，固定時間30-40分鐘，一般不要超過1小時。
1．常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。
3．石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化3--30分鐘(視標(biāo)本新舊、厚薄自行調(diào)整)。用戶可以比較不同的消化時間，例如5分鐘,10分鐘，20分鐘，30分鐘。以找到zuì佳的消化時間。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。其余步驟和冰凍切片6-16步相同。
結(jié)果觀察：
Actinin/Skeltal的細(xì)胞胞漿著色呈棕黃色。
注意事項：
由于特定的mRNA序列僅占總mRNA的少數(shù)，加上基因僅由四個堿基排列組合而成，因此原位雜交容易出現(xiàn)非特異性染色。通過不加探針和用陰性標(biāo)本做對照，基本可以確定染色是否為特異性的。有明顯的非特異性染色現(xiàn)象時，用預(yù)雜交液對含探針的雜交液進(jìn)行稀釋，一般稀釋2—10倍；并應(yīng)加強(qiáng)探針雜交后的洗滌。如果有少量的細(xì)胞核著色屬于正常情況；如果出現(xiàn)大量的細(xì)胞核著色，往往和標(biāo)本固定時間過長有關(guān)，應(yīng)重新處理標(biāo)本。

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