病毒沉淀劑是高品質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，我公司的病毒沉淀劑品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...

特別提示：包括病毒沉淀劑在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱(chēng)：病毒沉淀劑
英文名稱(chēng)：Virus Precipitation Reagent
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN110810
產(chǎn)品規(guī)格：100mL

生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來(lái)，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過(guò)程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 能濃縮病毒100倍以上，適合各種病毒。
2. 比超速離心法、密度梯度離心分離法和過(guò)濾法更溫和，回收率更高，并且大部分病毒能保持活性，適合各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)，包括轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和核酸純化。
3. 比超速離心法和密度梯度離心分離法簡(jiǎn)單，不需要大型離心機(jī)等設(shè)備。
4.適合水樣、細(xì)胞培養(yǎng)基上清和其他不含細(xì)胞的樣品。本產(chǎn)品100mL可以處理400mL含病毒的溶液，可以將病毒濃縮100倍以上。
5. 已經(jīng)成功用于coronaviruses 、rhabdoviruses 、parainfluenzaviruses 、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。
6. 對(duì)環(huán)境水樣，請(qǐng)不要使用本產(chǎn)品，而是使用水體病毒沉淀劑。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑：PBS緩沖液或TES緩沖液(用于重懸病毒)

使用方法：
注意：需要盡量減少含病毒溶液中蛋白的濃度。收集培養(yǎng)細(xì)胞分泌的病毒前，zuì好換上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培養(yǎng)基。
1. 將培養(yǎng)細(xì)胞刮下，和培養(yǎng)基一起全部轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中，10000rpm 4℃離心20分鐘。轉(zhuǎn)移上清(含病毒)到新離心管中。如果培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)還有病毒顆粒，并且病毒顆粒可以抵抗凍融，則可以把細(xì)胞凍融數(shù)次，釋放出包漿的病毒，然后再轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中，10000rpm 4℃離心20分鐘。轉(zhuǎn)移上清(含病毒)到新離心管中。如果病毒溶液不含細(xì)胞成分，則直接進(jìn)入下一步。
2.在含病毒的上清中加入1/4 總體積的本產(chǎn)品(4mL 病毒溶液則加1mL 本產(chǎn)品)，4℃冰箱中放置過(guò)夜或12小時(shí)以上。病毒在此期間將形成沉淀。
3. 10000rpm 4℃離心20分鐘收集病毒沉淀，盡可能棄掉所有上清(可以暫時(shí)保留上清，等確認(rèn)病毒濃縮成功后再丟棄)。
4. 將離心管放回離心機(jī)短暫離心數(shù)秒，再次小心去除殘留上清。
5. 將沉淀(病毒顆粒)溶于適量預(yù)冷的自備的緩沖液(如PBS緩沖液、TES緩沖液和培養(yǎng)基中，取決于后續(xù)實(shí)驗(yàn))，立即使用或者-20℃長(zhǎng)期保存。

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名稱(chēng)：動(dòng)物RNA提取試劑(TRIzol)
貨號(hào)：BTN3070
規(guī)格：100mL
本試劑盒是類(lèi)似于TRIzol、基于異硫氰酸胍/酚/氯f(wàn)ǎng提取原理的快速總RNA提取試劑，可用于從各種動(dòng)物組織(包括白細(xì)胞)和部分植物材料中快速提取總RNA。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 操作簡(jiǎn)單快速，只要10分鐘左右，可以全在室溫下進(jìn)行。
2. RNA 質(zhì)量高，OD260/OD280一般在1.9左右。一般不含用RT-PCR可以檢測(cè)到的基因組DNA污染。
3.適用于大部分實(shí)驗(yàn)材料，如培養(yǎng)細(xì)胞、各種動(dòng)物材料和少數(shù)植物材料。植物RNA的提取zuì好使用植物RNA提取試劑盒。
4. 高于進(jìn)口TRIzol和TRI Reagent等同類(lèi)產(chǎn)品。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：下面的操作步驟是用1mL 本產(chǎn)品進(jìn)行的微量提取的，細(xì)胞使用量一定要準(zhǔn)確，不能超過(guò)下述用量，否則將超出本產(chǎn)品的裂解能力，RNA產(chǎn)量將急劇降低。如果樣品量大，請(qǐng)按比例增加各成份的用量。RNA 工作環(huán)境zuì好用的固相RNase清除劑(BTN3080)徹底處理。
1. 對(duì)貼壁細(xì)胞(10 平方厘米)：吸盡培養(yǎng)液，加入1mL的本產(chǎn)品用槍充分吹打確保細(xì)胞全部裂解，然后將裂解液轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中，進(jìn)入第6 步。
2. 對(duì)懸浮細(xì)胞(五百萬(wàn)至一千萬(wàn)個(gè))：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，加入1mL本產(chǎn)品，用槍充分吹打確保細(xì)胞全部裂解，然后將裂解液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5mL塑料離心管中，進(jìn)入第6 步。
3. 對(duì)新鮮組織(50-100mg)：將新鮮組織剪切成小塊，放入10mL或15mL塑料離心管中，加入1mL的本產(chǎn)品，用Polytron 剪切式勻漿器冰上勻漿30秒左右，將勻漿液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL塑料離心管中，進(jìn)入第6步。注意：對(duì)肝、脾、胰、腎等細(xì)胞分裂十分旺盛的組織(細(xì)胞中含大量正在復(fù)制的DNA)，使用量不要超過(guò)30-50mg，否則十分容易產(chǎn)生DNA污染。對(duì)10mg以下的組織，zuì好加入本公司的微量RNA 助沉劑。
4. 對(duì)RNAhold 保存的組織(50-100mg)：先用紙吸去RNAhold液體后再剪切成小塊，其余操作同第3 步。RNAhold處理后的組織韌性很強(qiáng)，勻漿時(shí)間需要適當(dāng)延長(zhǎng)。
5. 對(duì)液氮中保存的組織(50-100mg)：在研缽中研磨成粉，加入1mL 本產(chǎn)品，用槍充分吹打確保細(xì)胞全部裂解，然后將裂解液轉(zhuǎn)移到干凈的1.5mL塑料離心管中，進(jìn)入第6 步。
6.在裝有裂解物/勻漿物的1.5mL塑料離心管中加入0.2mL自備氯f(wàn)ǎng，振蕩器上充分振蕩混均30秒。注意：一定要把官底的溶液震蕩起來(lái)，否則只是液面的振動(dòng)。
7. 13000-15000g室溫離心3分鐘。
8. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機(jī)相(藍(lán)色)和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險(xiǎn)起見(jiàn)，可以留下50-100μl上清液不取。
9. 對(duì)脂類(lèi)豐富的組織(如脂肪組織和腦組織)，需再重復(fù)氯f(wàn)ǎng抽提一到兩次以讓氯f(wàn)ǎng充分去除脂類(lèi)分子。
10.在上清液中加入等體積的異丙醇，振蕩器上振蕩30秒混勻。
11. 13000-15000g室溫離心5分鐘，離心底的側(cè)面將形成RNA沉淀。如果組織使用量低于10mg或需要提高RNA 回收率，可以將離心時(shí)間延長(zhǎng)到20或30分鐘。
12.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
13.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL 75%乙醇，振蕩混勻30秒。
14. 13000-15000g室溫離心1分鐘。
15.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
16. 重復(fù)第13-15的洗滌步驟一次(也可以省略)。
17. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50μL)。注意不要吸棄RNA
沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的后續(xù)使用。
18.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100μl RNase-free 水使RNA沉淀溶解。
千萬(wàn)不要用真空離心法使RNA沉淀過(guò)于干燥，否則RNA 將變得十分難溶。RNA樣品可以立即使用或存放于-80℃待用。
注意：由于RNase-free 水沒(méi)有主動(dòng)滅活殘留RNase的功能，而任何方法提取的RNA 都可能有殘留的RNase，所以強(qiáng)烈建議客戶使用本公司推出的具有主動(dòng)滅活殘留RNase 功能的、同時(shí)跟后續(xù)RT-PCR等反應(yīng)兼容的液相RNase 清除劑(BTN3091)。

附一：RNA 完整性的電泳檢測(cè)(僅供參考，本產(chǎn)品不含相關(guān)試劑)
如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是簡(jiǎn)單檢測(cè)，可以使用TAE緩沖液或超快核酸電泳液進(jìn)行常規(guī)電泳，但文獻(xiàn)報(bào)道必須使用RNAload這樣的變性上樣液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上樣液不含變性劑，也沒(méi)經(jīng)過(guò)去RNase處理，所以zuì好不要使用，否則RNA容易降解。
動(dòng)物RNA電泳后應(yīng)該在UV下呈現(xiàn)三條清晰的rRNA 帶，28S rRNA條帶的熒光強(qiáng)度一般比18S rRNA 條帶的熒光強(qiáng)度強(qiáng)1.5-2.3倍。如果這兩條rRNA 帶不清晰或比例小于此范圍則表示RNA 有降解(因?yàn)榇蟮腞NA 被酶降解的可能更大)。
跟動(dòng)物一樣，植物果實(shí)和種子的RNA一般有三條電泳帶，但植物葉片的RNA 有四條或更多rRNA帶，多余的RNA 來(lái)源于葉綠體。
如果電泳發(fā)現(xiàn)RNA樣品中有DNA污染(一般是使用過(guò)多樣品造成)，可分別用非酶DNA 清除劑或RNase-free DNase 清除。

附二：RNA產(chǎn)量和純度測(cè)定(僅供參考，本產(chǎn)品不含相關(guān)試劑)
用pH在7.5-8.2的TE緩沖液將5-10μL RNA稀釋10-20倍后在OD260和OD260測(cè)光吸收，通過(guò)光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。RNA的產(chǎn)率還隨組織的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)和組織的種類(lèi)不同而不同，一般來(lái)說(shuō)，代謝旺盛的組織(如肝臟和腎臟)RNA的產(chǎn)率高，代謝不旺盛的組織(如肌肉和脂肪組織)RNA的產(chǎn)率低，下面是常見(jiàn)動(dòng)物組織的RNA產(chǎn)率:
肌肉，胎盤(pán)和腦組織: 1-2μg RNA/mg 組織
肝，胰和腎組織: 5-10μg RNA/mg 組織
培養(yǎng)細(xì)胞: 5-15μg/10E6細(xì)胞
RNA的純度通過(guò)OD260/OD280 來(lái)確定，一般在1.8-2.1之間即算合格。但即使低于此范圍，一般也不會(huì)影響RT-PCR等反應(yīng)。
蛋白質(zhì)污染可以通過(guò)酚/氯f(wàn)ǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，多糖污染可以用多糖清除劑去除。

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