動植物組織RNA穩(wěn)定液是高品質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于生化實驗研究等領(lǐng)域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要動植物組織RNA穩(wěn)定液等RNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括動植物組織RNA穩(wěn)定液在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：動植物組織RNA穩(wěn)定液
英文名稱：Tissue Stabilizer
產(chǎn)品貨號：SY0267
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

RNA酶廣泛存在環(huán)境中，很容易降解新鮮采取的動植物組織、血液、體液等樣本中的RNA，從而使得研究人員在收集完新鮮樣本需要做液氮速凍，或者立即進行RNA的純化，給研究人員的戶外工作帶來很多不便。

動植物組織穩(wěn)定液（Tissue Stabilizer）是專門開發(fā)用于穩(wěn)定并保護采集樣本內(nèi)RNA的完整性，一種溶液，可迅速滲入組織，滅活內(nèi)源RNase。具有以下特點：

1）操作其簡便：只需要將新鮮組織切成合適大小（≤0.5 cm）的組織塊，浸入5~10倍體積的本品中即可。2）穩(wěn)定周期長：經(jīng)本品浸漬的組織/細胞可在37℃保存1天，室溫保存1周，4℃保存4周，-20℃/-80℃長期保存。3）下游兼容性廣：幾乎兼容于所有的RNA分離方法，如Total RNA Extraction Reagent總RNA抽提試劑，以及商業(yè)化的幾乎所有RNA抽提試劑盒，包括離心柱抽提法，磁珠純化法等。4）應(yīng)用性廣：可用于多種動植物組織如腦、心臟、肝臟、胰臟、腎臟、脾臟、睪丸、肌肉、植物的莖葉等的保存，還可用于酵母、組織培養(yǎng)細胞等。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）經(jīng)本品穩(wěn)定液處理的樣本還可做DNA的提取，甚至蛋白質(zhì)的提取，但由于本品會變性蛋白質(zhì)，因此不適合做天然蛋白的提取。
3）本本品穩(wěn)定液室溫保存過程中可能會產(chǎn)生一些沉淀，只需要在使用前放到37℃溫育片刻，并搖晃使其重溶即可。
4）本本品穩(wěn)定液僅適用于新鮮組織，不可用于冰凍組織。若需要保護冰凍組織內(nèi)RNA的穩(wěn)定性，可使用我司的本品-ICE冰凍動植物組織RNA穩(wěn)定-過渡溶液，即可在將冰凍組織恢復為勻漿用的組織狀態(tài)，并進行RNA抽提的過程中，維持RNA的穩(wěn)定性。

操作流程

1. 樣品處理：
A. 動物組織：本品穩(wěn)定液不會破壞動物組織結(jié)構(gòu)的完整性，因此，已經(jīng)浸入本品的組織平衡一段時間后，可從溶液中取出，切成更小的組織塊（≤0.5 cm大?。?，再重新放回本品穩(wěn)定液中。另外，某些動物組織如骨頭具有比較弱的液體滲透性，不適合用本品進行RNA保護。
使用：將組織切成合適的大小塊（≤0.5 cm大?。┖?，加入5倍體積的本品穩(wěn)定液。
B. 植物組織：植物組織天生具有的屏障如葉子表面的蠟層可阻礙本品穩(wěn)定液的滲透，往往需要破壞這些屏障層從而允許溶液的浸透。對于許多柔軟的植物組織如嫩葉，嫩莖等，本品可直接滲透且達到理想的RNA保護效果。
使用：將組織切成合適的大小塊（≤0.5 cm大?。┖?，加入5倍體積的本品穩(wěn)定液。
C. 組培細胞、白細胞：按照標準實驗操作方法收集細胞（用PBS清洗1-2次）。之后往細胞內(nèi)加入5～10倍體積的本品穩(wěn)定液。
D. 酵母：收集大約108個細胞 (12,000 g，2 min)，棄上清。加入0.5～1 ml的本品穩(wěn)定液。長期保存時應(yīng)將酵母細胞置于本品穩(wěn)定液中，4℃放置1小時。然后離心收集細胞 (12,000 g，5 min)，棄上清，再置于-80℃保存。

2. 樣品保存：
A. -80℃保存：對于歸檔的樣本建議-80℃保存，且效果zuì佳，樣本可長期保存，-80℃條件下本品溶液也會結(jié)凍。
先需要讓樣本4℃浸透過夜，然后再轉(zhuǎn)移到-80℃。如果中間需要做樣本的融化，建議取出4℃浸透過夜的組織或者離心收集細胞，然后再凍存在-80℃。之后，樣本可直接放在室溫融化，之后重新凍上，不會造成RNA量的嚴重損失或者RNA完整性的明顯破壞。
B. -20℃保存：也適用于歸檔樣本的保存。樣本不會在-20℃凍住，但可能會形成結(jié)晶。不會對后續(xù)RNA分離造成影響，樣本可長期保存。
先需要讓樣本4℃浸透過夜，然后再轉(zhuǎn)移到-20℃。之后，樣本可直接放在室溫融化。重新凍上后不會造成RNA量的損失或者RNA完整性的破壞。
C. 4℃保存：大部分樣品放到本品溶液中，穩(wěn)定保存1個月，不會有明顯的RNA降解發(fā)生。
D. 室溫（25℃）保存：建議低溫環(huán)境保存。若條件不允許，請將本品穩(wěn)定液于冰上冷卻幾個小時，然后將樣品浸入此溶液中，室溫穩(wěn)定保存1周，不會有明顯的RNA降解發(fā)生。
E. 37℃保存：純化的RNA樣本于37℃孵育24h，結(jié)構(gòu)依然完整。

3. RNA提?。?br /> 注意：RNase失活的過程是可逆的，在樣本使用前不要清洗掉本品穩(wěn)定液。
A． 組織樣本：直接用滅菌鑷子從本品穩(wěn)定液中取出組織塊，然后用干凈的吸水紙吸掉表面的液體。之后立即置于裂解液中勻漿。
B． 細胞樣本：由于本品穩(wěn)定液密度較大，此時需要使用大于普通介質(zhì)的離心力。一般來說，保存在本品穩(wěn)定液中的細胞能承受更高的轉(zhuǎn)速，并維持細胞的完整性。大部分細胞能夠承受離心速度 (5,000 g，5 min)，收集細胞沉淀。注意：由于不同細胞承受離心力會有差異，建議先用少量的細胞進行離心速度承受性的測試。
C．之后進行后續(xù)的RNA抽提，兼容各種常見的RNA抽提試劑，以及商業(yè)化的RNA抽提試劑盒。

根據(jù)您的關(guān)注的動植物組織RNA穩(wěn)定液，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：水樣病毒沉淀劑
貨號：BTN101118
規(guī)格：10次

名稱：細菌RNA提取試劑盒
貨號：BTN51102
規(guī)格：100次
本試劑盒是在動物RNA提取試劑盒基礎(chǔ)上根據(jù)細菌提取的具體情況改良而得。它基于異硫氰酸胍/酚/氯fǎng提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各種常見的革氏陰性細菌。如果需要提革氏陽性細菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以選擇真菌RNA提取試劑盒。

試劑盒特點：
1. 操作簡單快速，只要十分鐘左右,可以全在室溫下進行。
2. 所得 RNA 質(zhì)量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 靈敏度高，可以從一個菌落中提取到普通電泳能夠檢測到的總 RNA。
4. 高于進口同類產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
細菌RNA提取試劑	100ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料離心管中離心收集0.2-1.5mL 新鮮細菌(注意:由于細菌RNA 半衰期十分短，所以，必須使用zuì新鮮細菌)，吸盡液體培養(yǎng)基，加入1mL細菌RNA提取試劑盒并用槍充分吹打，確保細菌全部裂解，沒有塊狀物。
 如果使用菌落，則用接種環(huán)小心將其轉(zhuǎn)移到裝有1mL細菌RNA提取試劑盒的1.5 m塑料離心管中，用移液槍吹打均勻。在細菌數(shù)較少時，建議使 用助沉劑 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL 氯fǎng，在振蕩器上充分振蕩混均 30秒(必須將管底的液體振蕩起來，否則不能有效將DNA 打斷和去除蛋白質(zhì))。
3. 12000～15000g室溫離心3分鐘。上清液無色，下層液呈籃色，中間為蛋白質(zhì)。小心將上清液轉(zhuǎn)移到另一干凈 1.5ml塑料離心管中，上清液體積約為0.6mL。為避免觸及中間層的DNA和蛋白質(zhì)，建議分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。當細菌數(shù)量較少時，中間層十分松散，上清時很容易吸到下層有機相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等體積的異丙醇，振蕩器上振蕩混均 30秒。
5. 12000～15000室溫離心 3-10分鐘，RNA 將在管底側(cè)面形成沉淀。
6.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA沉淀。
7.在離心管中加入1mL 75%乙醇，振蕩器上振蕩混均 30秒。
8. 12000～15000g室溫離心 1分鐘。
9.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA沉淀。
10. 重復第 8 到第 10 步一次。
11. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留液(約50μl)。
12. 短暫放 1-2分鐘后加入適量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃長期保存。
13. RNA 完整性的電泳檢測：
 如果需要做 Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是簡單檢測，可以使用TAE或百奧萊博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 兩用快速電泳液，但文獻報道必須使用變性上樣液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上樣液不含變性劑，也沒經(jīng)過去 RNase處理，所以zuì好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE進行RNA電泳，因為TBE 所含硼酸是研究多糖的經(jīng)典方法----硼酸絡(luò)合法中的關(guān)鍵成分，硼酸通過與RNA 核糖中的羥基發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合復合物，使同樣長度的RNA 具有不同的泳動速度，電泳條帶彌散，同時有大的RNA 絡(luò)合復合物遲留在加樣孔中(一般會誤以為是基因組DNA污染)。RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合物的形成的多少和比例又與硼酸與RNA的數(shù)量比例有關(guān)，而RNA樣品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也會參與此反應(yīng)，使硼酸對RNA電泳的影響更復雜，所以TBE 對RNA電泳的影響沒有規(guī)律性和重復性。有的樣品可以使用有的又不行，zuì好是避免使用。
 由于細菌細胞中70-80%的RNA為rRNA，后者又由23S(約3700nt)，16S(約1700nt)和5S(約100nt)三種組成，所以變性膠電泳后應(yīng)該在UV下看見三條清晰的rRNA帶。由于核酸長度與結(jié)合 EB的數(shù)量成正比(當然還與RNA的二級結(jié)構(gòu)有關(guān)，雙鏈部分結(jié)合能力比單鏈部分強)，所以23S rRNA條帶的熒光強度一般比16S rRNA條帶的熒光強度強2倍。如果這兩條rRNA 帶不清晰或比例小于此范圍則表示 RNA 有降解(因為大的RNA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：
 將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出 RNA的產(chǎn)量和產(chǎn)率。注意不要將RNA 稀釋在 DEPC 水中檢測 OD260和OD280，否則光吸收比在 TE中測得的低 10%-15%，因為核酸光吸收跟溶液 pH相關(guān)，而 DEPC 水中的DEPC高壓分解后產(chǎn)生的CO2與水反應(yīng)生成碳酸，使溶液 pH降低進而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 純度測定：
 無污染的總 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之間，如果低于或高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)或多糖的污染，但一般不影響 RT-PCR等反應(yīng)。蛋白質(zhì)污染可以通過酚/氯fǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分別用百奧萊博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA嗎？
A：不是。用 TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳 RNA時容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，百奧萊博初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過堿基互補或通過硼酸絡(luò)合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復合物，加 RNase處理后，這些紅色熒光物一般會消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使RNA變性。使用百奧萊博優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非變性膠上電泳時也有較好分辨率。使用非變性膠時，可以使用TAE或超快電泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE緩沖液，因為TBE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認和去處除污染的基因組 DNA？
A：如果懷疑有 DNA污染，可以用 RNase處理 RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組 DNA污染。進一步確認可以使用 PCR擴增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴格按照廠家提供的使用說明書進行操作。

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN160907	植物RNA提取試劑盒2.0(無氯fǎng柱式提取)	50次
BTN80104	一站式miRNA柱式提取試劑盒	50次
BTN90904	膜結(jié)合DNA清除試劑盒	50次
BTN80918	Tris鹽酸溶液(1M,pH8.5)(RNase-free)	250mL
BTN71207	RNA洗脫液	10mL
WE0192	超純RNA提取試劑盒	50次|200次
WE0404	RNA樣本保存液	100ml|500ml

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