動(dòng)物RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，我公司專注于RNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的動(dòng)物RNA提取試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括動(dòng)物RNA提取試劑盒(柱式Trizol)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：動(dòng)物RNA提取試劑盒(柱式Trizol)
英文名稱：Animal RNA column extraction kit(Trizol)
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN71201
產(chǎn)品規(guī)格：50次

本試劑盒是動(dòng)物總RNA快速提取試劑動(dòng)物RNA提取試劑盒(BTN3070)的柱式升級(jí)產(chǎn)品，可用于從各種動(dòng)物組織(包括白細(xì)胞)快速提取總RNA。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 操作更加簡單快速，整個(gè)過程只需要不到十分鐘(對一個(gè)樣品而言)。
2. RNA 純度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以檢測到的基因組DNA污染。
4.適用于培養(yǎng)細(xì)胞、大部分動(dòng)物組織和部分植物組織。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。
6. 高于進(jìn)口的柱式RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脫液	10ml
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步驟是針對在1.5mL塑料離心管中進(jìn)行的微量提取的，如果處理樣品量大，請按比例增加各成份的用量并使用大的離心管和離心機(jī)。

1. 根據(jù)組織細(xì)胞類型的不同分為下面及種情況使用：
a)對貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)液，在每10 平方厘米細(xì)胞中加入1mL溶液A，用槍輕柔吹打數(shù)次，確保細(xì)胞全部裂解。
b)對懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，在每1-5×106 懸浮細(xì)胞中加入1mL溶液A，用槍輕柔吹打數(shù)次，確保細(xì)胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的細(xì)胞使用量不要超過1×106個(gè)細(xì)胞。
c)對新鮮組織：先將剪切成小塊新鮮組織或液氮保存的組織放入10mL或15mL塑料離心管中，每50-100mg 組織加1mL溶液A，用勻漿器勻漿30秒左右。對肝、脾、胰、腎等細(xì)胞分裂十分旺盛的組織(細(xì)胞中含大量正在復(fù)制的DNA)，建議組織的使用量不要超過50mg/ mL溶液A，否則十分容易產(chǎn)生DNA污染。
d)對RNAhold 保存組織：先用紙吸去RNAhold液體后再剪切成小塊，其余操作同新鮮組織的處理。
2. 將裂解物轉(zhuǎn)移至一個(gè)干凈的1.5mL塑料離心管中，然后加入0.2倍體積的自備氯fǎng(1mL溶液A需0.2mL 氯fǎng)，振蕩器上充分振蕩混均30秒。
3. 12000rpm室溫離心3～5分鐘。
4. 將上清液(約0.6-0.8mL的無色透明水相，有時(shí)水相比重大時(shí)，水相在下層，有機(jī)相即藍(lán)相在上層，吸取時(shí)應(yīng)吸取透明水相)轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的1.5mL塑料離心管中。注意：離心后下層有機(jī)相和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險(xiǎn)起見，可以留下100μl上清液不取。同時(shí)吸取上清時(shí)zuì好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見的絲狀DNA。
5. 加入等體積的溶液B，充分顛倒混勻。
6. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
7. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
10.室溫12000 rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)影響RNA的使用。
11. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脫液。
12.室溫12000 rmp離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的電泳檢測：本試劑盒提取的RNA zuì好用甲醛變性膠電泳，如果在非變性的普通瓊脂糖膠(in TAE或TBE buffer)上電泳，一定要使用RNA 專用上樣液RNAload(操作詳見RNAload 使用手冊)，千萬不要使用常用的DNA上樣液，因?yàn)镈NA上樣液沒有經(jīng)過去RNase處理，也不能將RNA變性，得到的帶型將十分雜亂。
14. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
16. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是DNA污染嗎？
A：不是。用TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳RNA時(shí)容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，我們初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA通過堿基互補(bǔ)或通過硼酸絡(luò)合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加RNase處理后，這些紅色熒光物(RNA)一般會(huì)消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳和RNA 專用上樣液(如RNAload)。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組DNA？
A：如果懷疑有DNA污染，可以用RNase處理RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用百奧萊博的非酶的DNA去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用說明書進(jìn)行操作。

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名稱：昆蟲RNA柱式提取試劑盒
貨號(hào)：BTN81220
規(guī)格：50次
本試劑盒是專門用于從富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的動(dòng)物樣品(尤其是昆蟲樣品)中提取總RNA的試劑。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 操作簡單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。
2. RNA純度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。
3.適用于各種昆蟲組織，每100mg組織能提取到20-30μg 總RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。
5.一站式，提供RNase-free的樣品收集管。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存(RNA洗脫液zuì好4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 將50-300mg昆蟲組織放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎昆蟲組織，硯磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
2. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。
3.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備氯fǎng，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來。
4.室溫12000 rmp離心3～5分鐘，兩相間將有約5-10毫米厚的細(xì)胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。
7. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000 rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000 rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液，室溫12000 rmp離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液，室溫12000 rmp離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
11.室溫12000 rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。
12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
13. 12000 rmp室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。注意：大部分昆蟲的28S RNA被切割成兩個(gè)小的片段，彼此用氫鍵相連，所以在甲醛變性膠中，沒有28S帶出現(xiàn)(文獻(xiàn)見：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7)
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
16. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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