組織細(xì)胞總RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多組織細(xì)胞總RNA提取試劑盒等RNA提取純化產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括組織細(xì)胞總RNA提取試劑盒(柱式吸附去除DNA)(非TRIzol法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：組織細(xì)胞總RNA提取試劑盒(柱式吸附去除DNA)(非TRIzol法)
英文名稱：Total RNA Extraction Kit From Cell & Tissue
產(chǎn)品貨號：ALH019
產(chǎn)品規(guī)格：20次|50次

本試劑盒適用于快速提取動物細(xì)胞和易裂解動物組織總RNA，是在無苯酚、lǜ仿RNA快速提取技術(shù)基礎(chǔ)上，又采用基因組DNA清除柱技術(shù)確保有效清除gDNA殘留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、熒光定量PCR等實驗。獨特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶，然后裂解混合物通過一個基因組DNA清除柱，基因組DNA被清除而RNA穿透濾過。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜， 再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟, 去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物，蛋白等雜質(zhì)去除， zuì后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點：
1.完全不使用有毒的苯酚，lǜ仿等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。
2.快速，簡捷，單個樣品操作一般可在30分鐘內(nèi)完成。
3.基因組DNA清除柱技術(shù)確保有效清除gDNA殘留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、熒光定量PCR等實驗。
4.多次柱漂洗確保高純度，OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9～2.0，基本無DNA殘留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各種實驗。

試劑盒組分：

組份	20次	50次
裂解液RLT Plus	20ml	50ml
去蛋白液RW1	15ml	40ml
漂洗液RW	5ml	10ml
RNase-free H2O	10ml	10ml
70%乙醇	4ml	9ml
基因組DNA清除柱和收集管	20套	50套
吸附柱和收集管	20套	50套

儲存條件：室溫，有效期一年。

注意事項：
1. 所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī)，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2. 樣品處理量不要超過基因組吸附柱和和RNA吸附柱處理能力，否則造
成DNA殘留或者產(chǎn)量降低。不同組織細(xì)胞種類RNA/DNA相差大，例如胸腺脾臟DNA含量豐富，超過5mg就會超過柱子處理能力。COS細(xì)胞RNA含量豐富，超過3x106細(xì)胞就會超過柱子吸附能力。所以開始摸索實驗條件時，如果不清楚樣品DNA/RNA含量時寧可使用較少的樣品處理量，如細(xì)胞不超過3-4x106，組織不超過10mg。將來根據(jù)樣品試驗情況增加或者減少處理量。
3. 裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4. 預(yù)防RNase 污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1) 經(jīng)常更換新手套。因為皮膚經(jīng)常帶有細(xì)菌，可能導(dǎo)致RNase 污染。
2) 使用無RNase 的塑料制品和槍頭避免交叉污染。
3) RNA 在裂解液RLT Plus 中時不會被RNase 降解。但提取后繼續(xù)處理過程中應(yīng)使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分鐘，然后用水徹底清洗，再滅菌，即可去除RNase。4) 配制溶液應(yīng)使用無RNase 的水。（將水加入到干凈的玻璃瓶中，加入DEPC 至終濃度0.1%( v/v)，37℃放置過夜，高壓滅菌。）
5. 關(guān)于DNA 的微量殘留：
一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA 的微量殘留（DNase 消化也無法做到無殘留），本試劑盒由于采取了本公司獨特的緩沖體系和基因組DNA 清除柱技術(shù)，大多數(shù)DNA 已經(jīng)被清除，不需要DNase 消化，可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR 和熒光定量PCR。個別特殊情況如DNA 含量過于豐富造成殘留或者要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA 表達(dá)量分析熒光定量PCR，我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時：
1) 選用跨內(nèi)含子的引物,以穿過mRNA 中的連接區(qū),這樣DNA 就不能作為模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。
2) 選擇基因組DNA 和cDNA 上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對。
3) 將RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 處理以提果。本試劑盒還可以用于DNase I 處理后的RNA清潔,請聯(lián)系我們索取具體操作說明書。
4) 在步驟去蛋白液RW1 漂洗前，直接在吸附柱 上進(jìn)行DNase I 處理。請聯(lián)系我們索取具體操作說明書。
6. RNA 純度及濃度檢測：

完整性： RNA 可用普通瓊脂糖凝膠電泳(電泳條件：膠濃度1.2%；0.5×TBE 電泳緩沖液；150v，15 分鐘)檢測完整性。由于細(xì)胞中70%-80%的RNA 為rRNA，電泳后UV 下應(yīng)能看到非常明顯的rRNA 條帶。動物rRNA 大小分別約為5 kb 和2kb，分別相當(dāng)于28S 和18S rRNA。動物RNA 樣品中zuì大rRNA 亮度應(yīng)為次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍，否則表示RNA 樣品的降解。出現(xiàn)彌散片狀或條帶消失表明樣品嚴(yán)重降解。

純度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白質(zhì)污染程度的參考指標(biāo)。高質(zhì)量的RNA，OD260/OD280 讀數(shù)（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之間。OD260/OD280 讀數(shù)受測定所用溶液的pH 值影響。同一個RNA 樣品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中測出的OD260/OD280 讀數(shù)1.8-2.1 之間，在水溶液中所測讀數(shù)則可能在1.5-1.9之間，但這并不表示RNA 不純。

濃度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀釋n 倍，用RNase-free 水將分光光度計調(diào)零，取稀釋液進(jìn)行OD260, OD280 測定，按照以下公式進(jìn)行RNA濃度的計算：終濃度（ng/μl）= (OD260)×(稀釋倍數(shù)n)×40。

本制品別名：組織總RNA提取試劑盒|組織總RNA分離試劑盒|組織總RNA純化試劑盒|細(xì)胞總RNA提取試劑盒|細(xì)胞總RNA分離試劑盒|組織總RNA純化試劑盒

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貨號	名稱	規(guī)格
BTN130972	miRNA分離純化試劑盒(凝膠法)	50次
BTN3290	RNase抑制劑(人源)(40U/μL)	2500U
BTN130699	RNase抑制劑(小鼠源)(40U/μL)	3000U
BTN3090	表面RNase清除劑	250mL
BTN90318	柱式DNA清除劑	50次
BTN100804	lǜ仿-異戊醇混合溶液	250mL
ALH067	血漿miRNA提取試劑盒	50次

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名稱：非凍型血液RNA保存液
貨號：BTN111202
規(guī)格：100mL
由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是臨床分子生物學(xué)研究中的一個棘手的問題。為解決此問題，本公司在非凍型組織RNA保存液的基礎(chǔ)上，開發(fā)了本產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點：
1. 能快速滲透到新鮮血液細(xì)胞內(nèi)，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常溫可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3個月。
2. 操作簡單，直接將本產(chǎn)品和新鮮血液細(xì)胞沉淀按比例混合即可。
3.適用于人新鮮血和哺乳動物新鮮血液，不適用于陳舊血液和凍凝血液，也不適用于禽類血液和其他動物血液。
4. 重復(fù)性好，效果跟進(jìn)口同類產(chǎn)品相當(dāng)。
5. 保存的樣品可直接用本公司血液RNA提取試劑盒提取RNA。

儲存條件：室溫運輸及保存，有效期兩年。

使用方法：
注意：RNase污染無處不在，zuì好用本公司的固相RNase清除劑處理RNA工作區(qū)域，千萬不要使用烷基化試劑DEPC(相當(dāng)于芥子氣)。

一:以白細(xì)胞為材料的保存方法(此法效果好于全血保存法)
1.室溫1500-2000 g離心新鮮抗凝血液10-15分鐘，zuì上層為血漿，zuì下層為紅細(xì)胞，中間層為膜狀的、含白細(xì)胞的Buffy Coat(含白細(xì)胞多的血液此層可能很厚)。
2. 吸出血漿后，小心將中間的白細(xì)胞層吸出(允許污染部分紅細(xì)胞)到新的離心管中，加入5-10倍體積的本產(chǎn)品，混勻后放常溫(不超過30℃)保存不超過3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要現(xiàn)在4℃放置過夜，然后再離心去除保存液，zuì后再把細(xì)胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶會刺破白細(xì)胞，釋放出其中的RNA，在后續(xù)實驗去掉上清時會丟失)。

二：以EDTA抗凝全血為材料的保存方法
3. 將血液取到EDTA抗凝管中后，迅速將0.5mL血液與1.5mL本產(chǎn)品混合，充分顛倒混勻，然后放常溫(不超過30℃)保存不超過3天或者放-20℃保存3月(放-20℃前需要現(xiàn)在4℃放置過夜，然后再離心去除保存液，zuì后再把細(xì)胞沉淀放到-20℃。如果直接放入-20℃，冰晶會刺破白細(xì)胞，釋放出其中的RNA，在后續(xù)實驗去掉上清時會丟失)。

三：血液RNA的提取(本產(chǎn)品不含RNA提取試劑。此處以本公司的跟Trizol相當(dāng)?shù)膭游颮NA提取試劑盒操作步驟為參考。用戶也可以使用其他RNA純化試劑)
4. 提取RNA時，如果保存的白細(xì)胞在-20℃，則需要先室溫化凍，如果保存在常溫或4℃，則直接使用。
5. 取1.8mL混合液到新的2mL離心管中，5000g室溫離心1分鐘。
6.小心吸棄上清液(本產(chǎn)品)，細(xì)胞將形成沉淀(如果樣品時全血，沉淀中將含有大量血液蛋白)。注意：上清一般會很渾濁，一定要盡可能棄盡。有時沉淀上面有白色晶體出現(xiàn)，屬于正常現(xiàn)象。
7.在細(xì)胞沉淀中加入動物RNA提取試劑盒 1mL溶液A，劇烈震蕩30秒(不能感覺到震蕩即可，一定要看見管底液體旋轉(zhuǎn)起來，否則只是液體表面的震動，下同)。震蕩后顛倒幾次看溶液是否均勻，如果有顆粒狀物體說明還需要震蕩裂解。
8.室溫放置5分鐘以使細(xì)胞充分裂解。
9. 將0.2mL自備的lǜ仿加入到離心管中，劇烈震蕩30秒。
10. 12000～15000g4℃離心3分鐘。一般上清為無色的水相(含RNA，約0.5-0.9mL)；中間層為白色，含有DNA、蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞破碎物，不要觸及；下層為有機(jī)相，一般呈深紅色。注意：有時水相比重大于有機(jī)相，出現(xiàn)反相現(xiàn)象，此時應(yīng)該取下面的水相。
11.小心將水相轉(zhuǎn)移到另一自備的1.5mL塑料離心管中。如果水相超過0.75mL，則需要分成2管，否則在下步?jīng)]法加入等體積的異丙醇。
12. 加入等體積的異丙醇到水相中，充分顛倒混勻。
13. 12000～15000g4℃離心10分鐘沉淀RNA。
14. 吸棄上清。注意：如果離心后出現(xiàn)兩個相，則需要吸棄上面的一相，然后在下相(含RNA)中加入一倍體積的超純水和一倍體積的異丙醇，混勻后12000～15000g4℃離心10分鐘沉淀RNA，吸棄上清。
15. 將75% RNase-free乙醇加入到RNA沉淀中，震蕩幾秒后12000～15000g4℃離心1分鐘。
16. 棄上清
17. 12000～15000g4℃離心半分鐘，用移液槍去除殘留的液體。
18. 將20-50μL DEPC處理的水加入到沉淀中并吹打溶解，立即用于下述完整性、產(chǎn)率和純度的檢測，也可直接用于后續(xù)RT-PCR等試驗或存放于-80℃待用。

四: RNA的檢測(列出步驟僅供參考，本產(chǎn)品不提供相關(guān)產(chǎn)品)
19. RNA完整性的電泳檢測：強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因為非變性膠中單鏈RNA分子會自生折疊成各種形狀，尤其不能使用DNA上樣液，因為沒有經(jīng)過去RNase處理。
20. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA用TE緩沖液(pH8.2)稀釋10倍后檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。人血RNA產(chǎn)率一般為2-5μg/mL。
21. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。


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