北京百奧萊博供應(yīng)的TRIzol試劑用于生化實驗研究等領(lǐng)域，TRIzol試劑是我司眾多優(yōu)質(zhì)RNA提取純化之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括TRIzol試劑在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：TRIzol試劑
英文名稱：TRIzol Reagent
產(chǎn)品貨號：MT0010
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

TRIzol Reagent是一種可用于提取動植物和細(xì)菌來源的組織或細(xì)胞RNA的制品。樣本在進(jìn)行勻漿的過程中，TRIzol Reagent能夠充分破壞細(xì)胞，裂解細(xì)胞內(nèi)含物，同時可抑制RNA酶的活性，從而保持RNA的完整性。TRIzol Reagent具有很強的廣譜性，可以適用于各種樣品的總RNA提取，提取過程方便快速，整個操作在一小時內(nèi)便可以完成。該試劑可用于小量樣品（20-100mg組織、1×10⁶細(xì)胞）也適用于大量樣品（≥1g組織、>10⁷細(xì)胞）；對人、動物、植物組織、細(xì)菌均適用，可同時處理大量不同樣品，整個提取過程在一小時內(nèi)即可完成。分離的總RNA無蛋白質(zhì)和DNA污染，可用于Northern Blot、Dot blot、ployA篩選、體外翻譯、RNase保護(hù)分析和基因克隆。

樣本量及 RNA 產(chǎn)量：

樣本類型	樣本量	產(chǎn)量
白細(xì)胞	1×106個	10～20μg
植物材料	25mg	10～20μg
細(xì)胞	1×106個	8～15μg
肌肉/腦等組織	50mg	10～25μg
肝臟組織	50mg	100～300μg

儲存：2-8℃避光保存，可保存 2 年。
注意：該試劑含有強變性劑，請勿直接于皮膚接觸或吞咽，若接觸到皮膚或眼睛請盡快到醫(yī)院處理。實驗時務(wù)必穿實驗服，戴手套。
自備試劑：氯fǎng，異丙醇，70％乙醇（DEPC 水配置），RNase-Free H2O。

操作方法：

一、實驗前準(zhǔn)備：
RNA 制備的關(guān)鍵是要抑制細(xì)胞中的RNA 分解酶和防止所用器具及試劑中的RNA 分解酶的污染。因此，在實驗中必須采取以下措施：戴一次性干凈手套；使用RNA 操作專用實驗臺；在操作過程中避免講話等等。通過以上辦法可以防止實驗者的汗液、唾液中的RNA 分解酶的污染。
注意事項：
1. 盡量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，應(yīng)在使用前用0.1%DEPC 水溶液在37℃處理 12h，然后在120℃高壓滅30分鐘 以除去殘留的DEPC。
2. 用于 RNA 實驗的試劑，須使用干熱滅菌（180℃，60min）或使用上述方法進(jìn)行 DEPC 水處理滅菌后的玻璃容器盛裝（也可以使用RNA 實驗用的一次性塑料容器)，使用的無菌水須用0.1%的DEPC 處理后再進(jìn)行高溫高壓滅菌。
3. RNA 實驗用的試劑和無菌水都應(yīng)專用，避免混用后交叉污染。

二、實驗操作：
TRIzol Reagent的使用量情況如下：

10cm2貼壁培養(yǎng)細(xì)胞	1ml
1×106～10×106懸浮培養(yǎng)細(xì)胞	1ml
50-100mg的普通組織樣品（肌肉等）	1ml
30-50mg的特殊組織樣品（肝、脾等）	1-2ml
30-50mg的植物材料	1ml
白細(xì)胞（1×106）	1ml

TRIzol 使用方法：

	貼壁細(xì)胞	懸浮細(xì)胞、酵母、細(xì)菌	動植物組織
1.樣品預(yù)處理	每 10 cm2 生長的培養(yǎng)細(xì)胞中倒出培 養(yǎng)液，用PBS 清洗一次，盡可能移 除多余的溶液。	將懸浮培養(yǎng)細(xì)胞連同培養(yǎng)液一起 倒入離心管中，8,000 rpm離心2分鐘，棄上清，加入50μl無菌水 重懸細(xì)胞至無明顯沉淀。	將樣品轉(zhuǎn)移至用液氮預(yù)冷的研缽中，用研杵研磨組織，其間不斷加 入液氮，直至研磨成粉末狀。
2.加入TRIzol	加入1ml TRIzol，使裂解液均勻分布 于細(xì)胞表面，然后使用移液槍吹打細(xì) 胞使其脫落。將細(xì)胞的裂解液轉(zhuǎn)移至 1.5ml EP管中。	加入1ml TRIzol。	將研磨好的組織加入到裝有 1ml TRIzol的1.5ml EP管中。
3.裂解樣品	加入TRIzol 后立即手腕用力上下顛倒至細(xì)胞、組織粉末等分散均勻，無塊狀物。室溫靜置 5分鐘，使核酸蛋白 復(fù)合物完全分離。
4.加氯fǎng	加入200μl 氯fǎng，手腕用力振蕩 15s，室溫放置 2分鐘。
5.離心分層	13000rpm離心10分鐘，吸取600μl無色上清至新的1.5EP管中。
6.加異丙醇	向上述600μl上清液中加入600μl 異丙醇，手腕用力上下顛倒數(shù)次，于-20℃放置 5分鐘。
7.離心沉淀總RNA	13000rpm離心10分鐘，小心倒掉上清，留取底部總RNA 沉淀。
8.漂洗總RNA	向沉淀中每管加入1ml 70%乙醇，上下顛倒數(shù)次，13000rpm離心5分鐘，小心倒掉上清，留取底部 RNA 沉淀。
9.重復(fù)漂洗一次	重復(fù)步驟8再洗滌一次。
10.揮發(fā)殘留乙醇	倒掉洗液，再次短離心10s 后，用10μl Tip 頭吸干剩余的洗液，置于室溫使乙醇揮發(fā)干凈（～20分鐘）。
11.溶解總RNA	每管加入20～100μl TE Buffer或Rnase-Free H2O溶解總RNA。

常見問題分析：
1．抽提率低。
  可能原因：
  a. 樣品裂解或勻漿處理不徹底；
  b. RNA 沉淀未完全溶解。
2．A260/A280＜1.65。
  可能原因：
  a. 檢測吸光度時，RNA 樣品沒有溶于水，而溶于了TE中；
  b．樣品勻漿時加的組織量過多；
  c．分層后，吸取上清液不足 500μl；
  d．吸取水相時混入了有機(jī)相。
3．DNA 污染過多。
  可能原因：
  a. 樣品勻漿時加的試劑量太少或組織量過多；
  b. 樣品中含有有機(jī)溶劑。
  解決方法：使用該試劑通?；蚪MDNA 污染含量<0.1ng/μl，如需要徹底去除DNA的污染，請使用Rnase-Free DNase I（貨號：MT0090）消化去除基因組DNA 污染。如使用cDNA 鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒(含基因組去除劑)（貨號：MT0015）則無需提前消化去除基因組DNA 污染，該試劑盒中包含了去除基因組DNA 污染的試劑。

根據(jù)您的關(guān)注的TRIzol試劑，TRIzol試劑，MT0010，百奧萊博，，，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：

貨號	名稱	規(guī)格
BTN3060	非凍型組織RNA保存液	250mL
BTN160906	植物RNA提取試劑盒(無酚無氯fǎng柱式提取)	50次
BTN120503	藻類RNA柱式提取試劑盒	50次
BTN130847	柱式白色念球菌RNA提取試劑盒	50次
BTN3110	氧釩核糖核苷復(fù)合物(RVC/VRC)	10mL
BTN60201	非酶DNA清除劑(＞200nt)	1.5mL
BTN70801	非酶DNA清除劑-2(＜200nt)	15次

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名稱：動物RNA提取試劑盒(柱式Trizol)
貨號：BTN71201
規(guī)格：50次
本試劑盒是動物總RNA快速提取試劑動物RNA提取試劑盒(BTN3070)的柱式升級產(chǎn)品，可用于從各種動物組織(包括白細(xì)胞)快速提取總RNA。

試劑盒特點：
1. 操作更加簡單快速，整個過程只需要不到十分鐘(對一個樣品而言)。
2. RNA 純度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以檢測到的基因組DNA污染。
4.適用于培養(yǎng)細(xì)胞、大部分動物組織和部分植物組織。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA 合成等實驗。
6. 高于進(jìn)口的柱式RNA提取產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步驟是針對在1.5mL塑料離心管中進(jìn)行的微量提取的，如果處理樣品量大，請按比例增加各成份的用量并使用大的離心管和離心機(jī)。

1. 根據(jù)組織細(xì)胞類型的不同分為下面及種情況使用：
a)對貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)液，在每10 平方厘米細(xì)胞中加入1mL溶液A，用槍輕柔吹打數(shù)次，確保細(xì)胞全部裂解。
b)對懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，在每1-5×106 懸浮細(xì)胞中加入1mL溶液A，用槍輕柔吹打數(shù)次，確保細(xì)胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的細(xì)胞使用量不要超過1×106個細(xì)胞。
c)對新鮮組織：先將剪切成小塊新鮮組織或液氮保存的組織放入10mL或15mL塑料離心管中，每50-100mg 組織加1mL溶液A，用勻漿器勻漿30秒左右。對肝、脾、胰、腎等細(xì)胞分裂十分旺盛的組織(細(xì)胞中含大量正在復(fù)制的DNA)，建議組織的使用量不要超過50mg/ mL溶液A，否則十分容易產(chǎn)生DNA污染。
d)對RNAhold 保存組織：先用紙吸去RNAhold液體后再剪切成小塊，其余操作同新鮮組織的處理。
2. 將裂解物轉(zhuǎn)移至一個干凈的1.5mL塑料離心管中，然后加入0.2倍體積的自備氯fǎng(1mL溶液A需0.2mL 氯fǎng)，振蕩器上充分振蕩混均30秒。
3. 12000rpm室溫離心3～5分鐘。
4. 將上清液(約0.6-0.8mL的無色透明水相，有時水相比重大時，水相在下層，有機(jī)相即藍(lán)相在上層，吸取時應(yīng)吸取透明水相)轉(zhuǎn)移到一個干凈的1.5mL塑料離心管中。注意：離心后下層有機(jī)相和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險起見，可以留下100μl上清液不取。同時吸取上清時zuì好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見的絲狀DNA。
5. 加入等體積的溶液B，充分顛倒混勻。
6. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
7. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
10.室溫12000 rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會影響RNA的使用。
11. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脫液。
12.室溫12000 rmp離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的電泳檢測：本試劑盒提取的RNA zuì好用甲醛變性膠電泳，如果在非變性的普通瓊脂糖膠(in TAE或TBE buffer)上電泳，一定要使用RNA 專用上樣液RNAload(操作詳見RNAload 使用手冊)，千萬不要使用常用的DNA上樣液，因為DNA上樣液沒有經(jīng)過去RNase處理，也不能將RNA變性，得到的帶型將十分雜亂。
14. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
16. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是DNA污染嗎？
A：不是。用TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳RNA時容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，我們初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA通過堿基互補或通過硼酸絡(luò)合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加RNase處理后，這些紅色熒光物(RNA)一般會消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳和RNA 專用上樣液(如RNAload)。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組DNA？
A：如果懷疑有DNA污染，可以用RNase處理RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用百奧萊博的非酶的DNA去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用說明書進(jìn)行操作。

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