ALH042 骨RNA提取試劑盒

骨RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持,本品用于科學(xué)研究,本產(chǎn)品質(zhì)量好,且具價(jià)格,深為用戶稱道,了解更多骨RNA提取試劑盒等RNA提取純化產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...
特別提示:包括骨RNA提取試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:骨RNA提取試劑盒
英文名稱:Bone tissue RNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號(hào):ALH042
產(chǎn)品規(guī)格:50次
本試劑盒適用于快速提取骨組織細(xì)胞總RNA,骨組織堅(jiān)硬、骨細(xì)胞密度低、而且外周基質(zhì)含有大量黏蛋白(蛋白多糖)和RNA難以分離,無法用傳統(tǒng)Trizol法進(jìn)行高質(zhì)量提取。本試劑盒采用獨(dú)特的不含苯酚/lǜ仿配方的裂解液,并添加多種成分去除骨組織蛋白多糖。同時(shí)獨(dú)特基因組DNA清除柱技術(shù)可以有效清除gDNA殘留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶,離心沉淀去除多糖和次級(jí)代謝產(chǎn)物,然后裂解混合物用乙醇調(diào)節(jié)RNA結(jié)合吸附到基因組DNA清除柱,然后RNA被選擇性洗脫濾過, 吸附在基因組DNA清除柱上的殘留DNA無法洗脫連同柱子一起丟棄從而清除掉DNA。濾過的RNA用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物,蛋白等雜質(zhì)去除, zuì后低鹽的RNase free H20將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。
試劑盒特點(diǎn):
1.完全不使用有毒的苯酚,lǜ仿等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。
2.簡捷,單個(gè)樣品操作一般可在35分鐘內(nèi)完成,上zuì簡單快速的試劑盒。
3.獨(dú)特研發(fā)成功基因組DNA清除柱技術(shù)可以有效清除gDNA殘留,得到的RNA一般不需要DNase消化,可用于反轉(zhuǎn)錄PCR、熒光定量PCR等實(shí)驗(yàn)。
4.適應(yīng)性廣泛,可以提取各種骨組織包括礦化骨組織。
5.多次柱漂洗確保高純度,OD260/OD280典型的比值達(dá)1.9~2.2,基本無DNA殘留,可用于RT-PCR,Northern-blot,二代測序和各種實(shí)驗(yàn)。
試劑盒組份:
組份 | 50次 |
裂解液CLB | 50ml |
Plantbalb | 5ml |
裂解液RLT Plus | 25ml |
去蛋白液RW1 | 40ml |
漂洗液RW | 10ml |
RNase-free H2O | 10ml |
吸附柱和收集管 | 50套 |
基因組DNA 清除柱和收集管 | 50套 |
注意事項(xiàng):
1. 所有的離心步驟均可在室溫完成(4℃離心也可以),使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī),如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī)。
2. 需要自備乙醇,研缽或者其它合適的破碎骨組織裝置。
3. 樣品處理量不要超過基因組清除柱DA和和RNA吸附柱處理能力,否則造成DNA殘留或產(chǎn)量降低。開始摸索實(shí)驗(yàn)條件時(shí),如果不清楚樣品DNA/RNA含量時(shí)可使用較少的樣品處理量,將來根據(jù)樣品試驗(yàn)情況增加或者減少處理量。
4. 裂解液CLB和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時(shí)戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5. 關(guān)于DNA 的微量殘留:
一般說來任何總RNA 提取試劑在提取過程中無法完全避免DNA 的微量殘留(DNase 消化也無法做到無殘留),本試劑盒RNA 提取產(chǎn)品,由于采取了本公司獨(dú)特的緩沖體系和基因組DNA 清除柱技術(shù),大多數(shù)DNA 已經(jīng)被清除,不需要DNase 消化,可直接用于反轉(zhuǎn)錄PCR 和熒光定量PCR。個(gè)別特殊情況如DNA 含量過于豐富造成殘留或者要進(jìn)行嚴(yán)格的mRNA 表達(dá)量分析熒光定量PCR,我們建議在進(jìn)行模板和引物的選擇時(shí):
1) 選用跨內(nèi)含子的引物,以穿過mRNA中的連接區(qū),這樣DNA就不能作為模板參與擴(kuò)增反應(yīng)。
2) 選擇基因組DNA和cDNA上擴(kuò)增的產(chǎn)物大小不一樣的引物對。
3) 將RNA提取物用RNase-free的DNase I 處理。本試劑盒還可以用于DNase I處理后的RNA清潔(cleanup) ,請聯(lián)系我們索取具體操作說明書。
4) 在步驟去蛋白液RW1漂洗前,直接在吸附柱上進(jìn)行DNase I柱上消化處理。購買DNA酶柱上消化試劑盒前可先索取具體操作說明書。
儲(chǔ)存條件:室溫,有效期12個(gè)月
本制品別名:骨組織RNA提取試劑盒|快速提取骨RNA試劑盒|骨組織RNA快速提取試劑盒
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名稱:昆蟲RNA柱式提取試劑盒
貨號(hào):BTN81220
規(guī)格:50次
本試劑盒是專門用于從富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的動(dòng)物樣品(尤其是昆蟲樣品)中提取總RNA的試劑。
試劑盒特點(diǎn):
1. 操作簡單快速,處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。
2. RNA純度高,平均 OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。
3.適用于各種昆蟲組織,每100mg組織能提取到20-30μg 總RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。
5.一站式,提供RNase-free的樣品收集管。
試劑盒組成:
成分 | 規(guī)格 |
溶液A | 50ml |
溶液B | 15ml |
溶液C | 50ml |
離心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50ml |
RNA洗脫液 | 10ml |
說明書 | 1份 |
儲(chǔ)存條件:常溫運(yùn)輸,4℃保存(RNA洗脫液zuì好4℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 將50-300mg昆蟲組織放入10-15mL塑料離心管中,加入1mL溶液A,然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫,但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎昆蟲組織,硯磨完后加入1mL溶液A。
注意:溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀,使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
2. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。
3.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備lǜ仿,在振蕩器上振蕩30秒混勻,此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來。
4.室溫12000 rmp離心3~5分鐘,兩相間將有約5-10毫米厚的細(xì)胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中,下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì),避免觸及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6. 加入等體積的溶液C,充分顛倒混勻。
7. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000 rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000 rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液,室溫12000 rmp離心半分鐘,棄穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液,室溫12000 rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。
11.室溫12000 rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。
12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50-100μl RNA洗脫液,室溫放置1-2分鐘。
13. 12000 rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的電泳檢測:如果需要做Northern雜交,強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳,因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。注意:大部分昆蟲的28S RNA被切割成兩個(gè)小的片段,彼此用氫鍵相連,所以在甲醛變性膠中,沒有28S帶出現(xiàn)(文獻(xiàn)見:Eva C. Winnebeck,Craig D. Millar and Guy R. Warman,Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10:1-7)
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定:將5-10μl RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL),進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
16. RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染,但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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